Dokument: Dynamik des Thrombuswachstums in vitro. Validierung digitaler Imaging-Techniken zur exakten Bestimmung der Thrombusvolumina

Titel:	Dynamik des Thrombuswachstums in vitro. Validierung digitaler Imaging-Techniken zur exakten Bestimmung der Thrombusvolumina
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=16833
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20101209-093947-4
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Peveling-Oberhag, Jan [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,48 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 07.12.2010 / geändert 07.12.2010
Beitragende:	Prof. Dr. Kolb-Bachofen, Victoria [Gutachter] Prof. Dr. Gödecke, Axel [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Die Visualisierung und Quantifizierung von Plättchenthromben unter arteriellen Flussbedin-gungen bei hohen Scherraten, entsprechend denen in Arteriolen, stellt eine große Herausforde-rung dar. Messung der Thrombusstabilität in Abhängigkeit der Blutrheologie bietet grundsätz-lich die Möglichkeit, wichtige Informationen zu einer Vielzahl klinischer Fragestellungen bei Krankheitsbildern mit thrombembolischer Genese zu liefern. Molekular-epidemiologische Studien haben gezeigt, dass Thrombozytenfunktion und arterielle Thrombogenese durch Polymorphismen von Plättchenmembranrezeptoren moduliert werden können. Hierbei wurde die Rezeptorvariante HPA-1b des Integrins alphaIIb beta3 als Risikofaktor für eine erhöhte Plättchenthrombogenität identifiziert. Die konfokale Lasermikroskopie ermöglicht, durch die Ge-nerierung von hochauflösenden Bildstapeln, die dreidimensionale Darstellung untersuchter Objekte. Durch die räumliche Rekonstruktion von in regelmäßigen Zeitintervallen akquirierten Bildstapeln gelingt die 4-dimensionale Messung von dynamischen Prozessen. Plättchen im Zitrat-antikoagulierten Vollblut, fluoreszenzgefärbt mit Mepacrin (10µM), wur-den mittels einer Perfusorpumpe durch eine rechteckige Flusskammer mit einer initialen Scherrate von 500s-1 aspiriert. Der Boden der Kammer wurde vorher mit Kollagen vom Typ 1 beschichtet und anschließend mit bovinem Serumalbumin (2%) geblockt. Die Flusskammer unter einem konfokalen Lasermikroskop (Axiovert 100M) befestigt. Während der Blutaspira-tion durch die Kammer wurde eine Serie von Bildstapeln, bestehend aus jeweils 30 optischen Schnittbildern, gemessen alle 25s, auf einer Untersuchungsfläche von 260µm2 akquiriert. Die generierten Daten wurden mit einer Voxel-basierten Software ausgewertet, wobei ein Voxel definiert ist durch ein Volumen von 2,025 x 10-10 mm3. Zu Validierungszwecken wurden definierte Mikrosphären mit einem Durchmesser von 6µm untersucht. Ihr Volumen konnte mit hoher Genauigkeit bestimmt werden (MW±SD: 130,42±17,49µm3). Repetitive Messungen mit dem Blut eines Individuums zeigten ein einheitliches Verlaufsmuster der bestimmten Thrombusparameter (Volumen, Höhe, Grundfläche und Anzahl). Bei einer initialen Scherrate von 500s-1 begann das Thrombus-wachstum nach einer Verzögerungsphase von 225s. Nach 420s erreichte der Zuwachs im Thrombusvolumen eine Plateauphase (MW±SD: 9,9 x 10-6±8,9 x 10-7mm3). Die Thrombus-bildung wurde bei spezifischer Blockade von alphaIIb beta3 durch Zugabe des chimären Antikörpers Abciximab (4µg/ml) komplett unterdrückt. Der HPA-1 Polymorphismus von alphaIIb beta3 zeigte einen signifikanten Einfluss auf das Thrombuswachstum. Im Vergleich der In-vitro-Thrombogenese von homozygoten Trägern von HPA-1b (n=7) mit Trägern von HPA-1a (n=8) zeigte sich bei Blutspendern mit dem HPA-1a-Genotyp ein vorzeitiges Erreichen der Plateau-phase im Gegensatz zur HPA-1b-Gruppe, welche konsekutiv höhere Thrombusvolumina bzw. Thrombushöhen aufwies (p<0,05 bzw. p<0,01). Die hier etablierte Voxel-basierte Methode zur dynamischen Quantifizierung von Thrombus-bildung und Thrombusprogression in vitro stellt eine valide Technik dar, um Thrombusvolumen, -anzahl, -höhe und -grundfläche zu vermessen und die spezifischen Charakteristika und die Dynamik der Thrombogenese quantitativ darzustellen. Bei den untersuchten Genotypen des Integrins alphaIIb beta3 konnte eine statistisch signifikante Steigerung von Volumen und Höhe der untersuchten Thromben in der HPA-1b Population nachgewiesen werden. Da das Thrombus-wachstum den Flusskanal innerhalb der Flusskammer sukzessive einengt, müssen die Thromben steigenden Scherraten widerstehen. Dieses Phänomen kann als indirekter Hinweis der Thrombusstabilität verwendet werden, so dass sich die Hypothese einer gesteigerten Thrombusstabilität beim HPA-1b Genotyps ergibt.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Hämostaseologie und Transfusionsmedizin
Dokument erstellt am:	09.12.2010
Dateien geändert am:	07.12.2010
Promotionsantrag am:	24.06.2010
Datum der Promotion:	03.12.2010