Dokument: Untersuchung zur Interaktion des Todesrezeptors CD95 und des Epidermalen Wachstumsfaktor Rezeptors in der Leber

Titel:	Untersuchung zur Interaktion des Todesrezeptors CD95 und des Epidermalen Wachstumsfaktor Rezeptors in der Leber
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=8430
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20080721-100918-5
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Eberle, Andrea [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 7,29 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 10.07.2008 / geändert 15.07.2008
Beitragende:	Prof. Dr. med. Häussinger, Dieter [Gutachter] Prof. Dr. Wunderlich, Frank [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:	Mittels Fluoreszenz-Resonanzenergie-Transfer (FRET) und Koimmunpräzipitationsstudien an mit Yellow Fluorescent Protein (YFP)- oder Cyan Fluorescent Protein (CFP)-markierten Fusionsproteinen wurde die durch Hyperosmolarität oder CD95-Ligand hervorgerufene Interaktion des Todesrezeptors CD95 und des Epidermalen Wachstumsfaktor Rezeptors (EGFR) nachgewiesen. Huh7 Hepatomazellen, die mit EGFR-CFP und CD95-YFP kotransfiziert wurden, zeigen in FRET-Studien eine schnelle, durch hyperosmolares Medium induzierte c-Jun- N-terminale Kinase (JNK)-abhängige Assoziation der beiden Proteine im Zytosol. Dieser Proteinkomplex transloziert mikrotubuliabhängig zur Plasmamembran. Wird die EGFR-Tyrosinkinaseaktivität durch AG1478 gehemmt, verhindert das die Phosphorylierung von CD95, die Translokation des Proteinkomplexes zur Plasmamembran und die Bildung des Death Inducing Signalling Complex (DISC). Es wurde die Notwendigkeit der EGFR-abhängigen Tyrosinphosphorylierung des CD95 für die durch Hyperosmolarität und CD95-Ligand induzierte Membranumverteilung und die DISC-Bildung gezeigt: Fluoreszenzmarkierte CD95-Mutanten, in denen an den potentiellen Phosphorylierungsstellen in Aminosäureposition 232 und 291 Tyrosin gegen Phenylalanin ausgetauscht wurde, translozieren nicht zur Membran und bilden keinen DISC, obwohl sie im Zytosol nach hyperosmolarer Stimulation oder Behandlung mit CD95-Ligand noch an EGFR gebunden vorliegen. Zellen, die mit diesen Mutanten transfiziert wurden, sind verglichen mit Zellen, die mit dem Wildtyp transfiziert wurden, resistenter gegenüber CD95-induzierte Apoptose. Ein alleiniger Austausch von einem der drei Tyrosinreste an Position 91, 232 oder 291 führt hingegen nicht zu einem signifikant vom Wildtyp abweichenden Verhalten. Des Weiteren konnte gezeigt werden, dass die CD95-Phosphorylierung für die CD95-Oligomerisierung notwendig ist. CD95-YFP/CD95-CFP transfizierte Huh7 Hepatomazellen zeigen 30 min nach Stimulation mit CD95-Ligand oder hyperosmolaren Bedingungen ein intrazelluläres FRET-Signal. Nach 120 min transloziert der CD95/CD95-Komplex zur Plasmamembran. Die CD95/CD95-Oligomerisierung konnte durch AG 1478 oder L-JNKI-1 verhindert werden, also durch Unterbindung der EGFR-katalysierten CD95- Phosphorylierung. Untersuchungen mit CD95-Mutanten in denen an den potentiellen Phosphorylierungsstellen in Aminosäureposition 232 und 291 Tyrosin gegen Phenylalanin ausgetauscht wurde, zeigten, dass diese Reste für eine Oligomerisierung der beteiligten Proteine notwendig sind. In Zellen, die endogen CD95 exprimieren, konnte gezeigt werden, dass durch EGF eine EGFR/EGFR-Homodimerisierung induziert wird, die der durch CD95 Ligand hervorgerufenen CD95/EGFRHeterodimerisierung entgegensteht. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass in dieser Arbeit eine Interaktion von EGFR und CD95 durch FRET nachgewiesen wurde. Außerdem wurden zwei Phosphorylierungsstellen des CD95 identifiziert, die für die frühen Ereignisse in der durch Hyperosmolarität und CD95-Ligand induzierten CD95 Aktivierung und Einleitung der Apoptose durch die Rezeptoroligomerisierung essentiell sind. Durch Inhibitorstudien konnten die an der Interaktion beteiligten Proteine erfolgreich eingegrenzt werden.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	15.07.2008
Dateien geändert am:	15.07.2008
Promotionsantrag am:	17.03.2008
Datum der Promotion:	09.07.2008