Dokument: Charakterisierung des heterolog in E. coli exprimierten Membranproteins P60 von Mycoplasma hominis: P60, ein sezerniertes Protein!
| Titel: | Charakterisierung des heterolog in E. coli exprimierten Membranproteins P60 von Mycoplasma hominis: P60, ein sezerniertes Protein! | |||||||
| Weiterer Titel: | Characterization of P60, a mycoplasma hominis membrane protein expressed in E. coli: P60, a secreted protein! | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=7473 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20080416-153955-8 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Hoffmann, Ricarda [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Henrich, Birgit [Gutachter] Prof. Dr. Köhrer, Karl [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Membranprotein Mycoplasma hominis, sezernierte Proteine, heterologe Expression P60 | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit | |||||||
| Beschreibung: | Charakterisierung des heterolog in E. coli exprimierten Membran-proteins P60 von Mycoplasma hominis: P60, ein sezerniertes Protein!
Vorgelegt von Ricarda Hoffmann Zur Charakterisierung seiner zytadhäsiven Eigenschaften war das Membranprotein P60 von M. hominis in Escherichia coli heterolog exprimiert worden (Klon 3.2). Dieses mit sechs Histidinen und der Dihydrofolatreduktase fusionierte P60 zeigte Adhäsion an HeLa-Zellen. Da ein Einfluss der Fusionspartner auf die Adhäsion nicht ausgeschlossen werden konnte, wurde versucht, rekombinantes P60 in E. coli oberflächenexponiert zu exprimieren, um in Ad-härenztests mit diesen P60 E. coli-Mutanten die Adhäsion dieses Proteins isoliert betrachten zu können. Um den Einbau in die äußere Membran von E. coli zu erreichen, wurde P60 in den Konstrukten MA3, MA4 und MA5 mit verschieden langen N-Termini des bei E. coli oberflächenlokalisierten Membranproteins TraT fusioniert. Zusätzlich wurde mit MA2 ein Klon hergestellt, der den P60-Vorläufer mit seiner intrinsischen mycoplasmalen Signalsequenz exprimiert. Bei der Charakterisierung der verschiedenen Zellfraktionen (wie Membran-, Zytoplasma- und Periplasmafraktion) dieser Konstrukte konnte P60 bei allen Klonen, inklusive 3.2 und MA2, in der Membran-haltigen Fraktion nachgewiesen werden. In FACS(Fluoreszenz aktivierter Zellsortierer)-Analysen der intakten E. coli-Konstrukte wurde jedoch deutlich, dass keine P60-Variante oberflächenexponiert vorlag. Die Analyse der Zellkulturüberstände zeigte vielmehr, dass P60 - je nach Variante in unterschiedlichem Ausmaß - in den Überstand der E. coli Kulturen abgeben wurde. Bei der Analyse des Kulturüberstandes einer M. hominis-Kultur auf das Vorkommen der Membranproteine P50, P60, P80 und P100 wurden nur P60 und P80 detektiert, von denen bekannt ist, dass sie in der Mycoplasmenmembran einen Komplex bilden und mit dem zytoplasmatischen HinT-Protein interagieren. So konnte im Rahmen dieser Arbeit gezeigt werden, dass es sich bei P60 und P80 nicht nur um einen an der Adhäsion beteiligten Proteinkomplex handelt, sondern dieser aktiv sezerniert wird, und dessen pathophysiologische Rolle nun zu untersuchen bleibt. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Medizinische Mikrobiologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 08.04.2008 | |||||||
| Dateien geändert am: | 08.04.2008 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 06.03.2007 | |||||||
| Datum der Promotion: | 18.12.2007 |
