Dokument: Analyse von residenten Zellen sowie Immunzellen im zentralen Nervensystem: Optimierung der Isolation und Durchflusszytometrie bei experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Titel:	Analyse von residenten Zellen sowie Immunzellen im zentralen Nervensystem: Optimierung der Isolation und Durchflusszytometrie bei experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=73734
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20260710-161259-9
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Henes, Antonia Charlotte [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 4,45 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 27.06.2026 / geändert 27.06.2026
Beitragende:	Prof. Dr. med. Ruck, Tobias [Gutachter] Prof. Dr. med. Distler, Jörg [Gutachter]
Stichwörter:	Multiple Sklerose, EAE, Neuroinflammation, Zellisolation, ZNS-residente Zellen
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die Multiple Sklerose (MS) stellt eine chronisch-entzündliche Autoimmunerkrankung des Zentralen Nervensystems (ZNS) dar, bedingt durch Demyelinisierungsprozesse, axonale Schäden, Gliose und Neurodegeneration. Die zugrundeliegende Pathophysiologie der MS ist bis heute noch nicht umfassend aufgeklärt. Gegenwärtige Therapiestrategien adressieren in erster Linie die initiale Neuroinflammation, zeigen jedoch in späteren Krankheitsstadien oft eine eingeschränkte Wirksamkeit. Daher herrscht weiterhin ein dringender Bedarf an der Identifikation spezifischer, therapeutisch wirksamer (molekularer) Ziele. Diese Dissertation beschäftigt sich mit der Optimierung und Erweiterung eines bestehenden Protokolls zur simultanen Isolation aller relevanten ZNS-residenten Zelltypen, einschließlich Oligodendrozyten, Mikroglia, Astrozyten und Neuronen, aus Mäusen mit Experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis (EAE) sowie naïven Mäusen. Dafür wurde das Tiermodell der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) bei C57BL/6J-Mäusen im Alter von 10-12 Wochen verwendet, welches wichtige pathophysiologische Merkmale der MS nachbildet. Die EAE-Induktion erfolgte durch die Injektion des Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein-Peptid 35-55 (MOG35-55), welches einen selbstlimitierenden, monophasischen Krankheitsverlauf reproduziert. Die Isolation der ZNS-residenten Zelltypen erfolgte durch sequentielle, magnetische Zellseparation. Nachfolgende Durchflusszytometrie-Analysen bestätigten die Generierung reiner und viabler Einzelzellsuspensionen mit einer durchschnittlichen Reinheit und Viabilität von etwa 85%. Darüber hinaus ermöglichte die Etablierung eines neuen durchflusszytometrischen Panels die gleichzeitige Analyse sowohl peripherer als auch zentraler Immunzelltypen aus demselben ZNS-Replikat. Dieses optimierte Zellisolationsprotokoll stellt somit einen signifikanten Fortschritt in der Analyse der Rolle der ZNS-residenten Zellen in der MS-Pathogenese dar. Zudem erlaubt es eine detailliertere Untersuchung der Interaktionen zwischen ZNS-residenten Zellen und infiltrierenden Immunzellen sowie deren zeitlicher und funktioneller Dynamik. Diese Forschungsarbeit leistet somit einen relevanten Beitrag zur Identifizierung pathophysiologisch und therapeutisch relevanter Zielstrukturen und kann so die Weiterentwicklung präklinischer und klinischer MS-Forschung unterstützen. Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by demyelination, axonal damage, gliosis and neurodegeneration. The underlying pathophysiology of MS is still not fully understood. Current therapeutic strategies primarily address the initial neuroinflammation, but often show limited efficacy in later stages of the disease. Therefore, there is still an urgent need to identify specific therapeutically effective (molecular) targets. This dissertation deals with the optimization and expansion of an existing protocol for the simultaneous isolation of all relevant CNS-resident cell types, including oligodendrocytes, microglia, astrocytes and neurons, from mice with experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and naïve mice. The animal model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6J mice aged 10-12 weeks was used for this purpose, which simulates essential pathophysiological features of MS. EAE was induced by injection of myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55), which triggers a self-limiting, monophasic disease course. CNS-resident cell types were isolated by sequential magnetic cell separation. Subsequent flow cytometry analyses confirmed the isolation of highly pure and viable single-cell suspensions with an average purity and viability of about 85%. In addition, the development of a new flow cytometric panel allowed the simultaneous analysis of both peripheral and central immune cell types from the same CNS replicate. This optimized cell isolation protocol thus represents a significant advance in the analysis of the role of CNS-resident cells in MS pathogenesis. It additionally allows a more detailed investigation of the interactions between CNS-resident cells and infiltrating immune cells, as well as their temporal and functional dynamics. This research is a significant contribution to the identification of pathophysiological and therapeutically relevant target structures and thus may support the further development of preclinical and clinical MS research.
Lizenz:	Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	10.07.2026
Dateien geändert am:	10.07.2026
Promotionsantrag am:	02.01.2026
Datum der Promotion:	16.06.2026