Dokument: Der Einfluss des SNP rs11057830 im Gen des Scavenger-Rezeptors B1 in Endothelzellen auf die Proteinexpression und Aktivität der endothelialen Stickstoffmonoxid-Synthase

Titel:	Der Einfluss des SNP rs11057830 im Gen des Scavenger-Rezeptors B1 in Endothelzellen auf die Proteinexpression und Aktivität der endothelialen Stickstoffmonoxid-Synthase
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=73241
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20260519-111159-3
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Magnon, Erminia Johanna [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 1,39 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 11.05.2026 / geändert 11.05.2026
Beitragende:	Prof. Dr. Suschek, Christoph [Gutachter] Prof. Dr. Csaba Mahotka [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die endotheliale Stickstoffmonoxid-Synthase (eNOS) und der HDL-Rezeptor Scavenger Rezeptor Klasse B Typ 1 (SR-B1) spielen eine zentrale Rolle in der Regulation vaskulärer Funktionen, u. a. des Cholesterintransports und damit des kardiovaskulären Risikos. Es ist bereits bekannt, dass Mutationen im SR-B1-Gen ein erhöhtes kardiovaskuläres Risiko bedingen. Die aktuelle Studie sollte untersuchen, ob genetische Modifikationen im SR-B1 Gen Unterschiede in der Expression von eNOS und SR-B1 bedingen und mögliche pathophysiologische Relevanzen für kardiovaskuläre Erkrankungen besitzen könnten. Darüber hinaus sollte die NO-Produktion pro Menge eNOS in den Zelllinien gemessen werden, um die Effizienz des Enzyms unter den Zelllinien vergleichen zu können. Dazu haben wir die Expressionsmuster von eNOS und SR-B1 und zusätzlich die eNOS-Aktivität in einer humanen endothelialen Hybridzelllinie EA.hy 926 sowie in zwei weiteren EA.hy 926 Zelllinien, in denen mittels der CRISPR-Cas 9-Methode eine Mutation (SNP rs11057830) im SR-B1-Gen eingebaut wurde, charakterisiert. Wir haben diese Parameter in unbehandelten Zellen evaluiert, aber auch in Zelllinien, die mit Acetylsalicylsäure, Vitamin E, HDL oder einem NO-Donor (DETA-NO) versetzt wurden. Die Proteinexpression von eNOS und SR-B1 wurde mittels Western Blot analysiert. Insgesamt wurden 20 Western Blots zur Untersuchung von eNOS und 12 Western Blots zur Analyse von SR-B1 unter gleichen experimentellen Bedingungen durchgeführt. Die NO Produktion der eNOS wurde durch mittels Chemilumineszenzdetektion bestimmt. Die Ergebnisse zeigten, dass unter allen Bedingungen und Behandlungen mit den oben genannten Substanzen die eNOS- und SR-B1-Expression in allen Zelllinien (Wildtyp und Zelllinien mit SR-B1-Mutationen) sowohl nach 24 als auch nach 48 Stunden zu keinen statistisch signifikanten Unterschieden führte. Die NO-Produktion pro eNOS-Menge zeigte ebenfalls keine signifikante Variabilität zwischen den Zelllinien. Die Daten deuten darauf hin, dass die genetischen Modifikationen in den Zelllinien keinen Einfluss auf die basale Expression von eNOS und SR-B1 ausüben. Auch die Effizienz der eNOS scheint nicht durch die SR-B1-Mutation beeinflusst zu werden. Dies lässt vermuten, dass die genetischen Variationen im SR-B1-Gen möglicherweise andere molekulare Mechanismen betreffen, die in dieser Untersuchung nicht erfasst wurden. Um die Auswirkungen dieser genetischen Veränderungen auf vaskuläre Funktionen besser zu begreifen, sind weitere Untersuchungen notwendig. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and the HDL receptor scavenger receptor class B type 1 (SR-B1) play a central role in the regulation of vascular functions, including cholesterol transport and thus cardiovascular risk. It is already known that mutations in the SR-B1 gene cause an increased cardiovascular risk. The current study was designed to investigate whether genetic modifications in the SR-B1 gene could cause differences in the expression of eNOS and SR-B1 and have possible pathophysiological relevance for cardiovascular diseases. In addition, the NO production per amount of eNOS in the cell lines should be measured in order to compare the efficiency of the enzyme among the cell lines. To this end, we characterized the expression patterns of eNOS and SR-B1 and additionally the eNOS activity in a human endothelial hybrid cell line EA.hy 926 and in two other EA.hy 926 cell lines in which a mutation (SNP rs11057830) in the SR-B1 gene was inserted using the CRISPR-Cas 9 method. We evaluated these parameters in untreated cells, but also in cell lines treated with acetylsalicylic acid, vitamin E, HDL or a NO donor (DETA-NO). The protein expression of eNOS and SR-B1 was analyzed by Western blot. A total of 20 Western blots were performed for the analysis of eNOS and 12 Western blots for the analysis of SR-B1 under the same experimental conditions. NO production of eNOS was determined by chemiluminescence detection. The results showed that under all conditions and treatments with the substances, eNOS and SR-B1 expression in all cell lines (wild type and cell lines with SR-B1 mutations) did not result in statistically significant differences at both 24 and 48 hours. NO production per amount of eNOS also showed no significant variability between the cell lines. The data suggest that the genetic modifications in the cell lines have no effect on the basal expression of eNOS and SR-B1. The SR-B1 mutation also does not seem to influence eNOS efficiency. This suggests that the genetic variations in the SR-B1 gene may involve other molecular mechanisms that were not assessed in this work. To better understand the impact of these genetic alterations on vascular functions, further investigations are required.
Lizenz:	Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	19.05.2026
Dateien geändert am:	19.05.2026
Promotionsantrag am:	01.12.2025
Datum der Promotion:	30.04.2026