Dokument: Untersuchungen zu Plättchen-Leukozyten- Aggregaten unter entzündlichen Bedingungen

Titel:	Untersuchungen zu Plättchen-Leukozyten- Aggregaten unter entzündlichen Bedingungen
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=72420
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20260309-081430-2
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Ahrazoglu, Talia [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 9,53 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 02.03.2026 / geändert 02.03.2026
Beitragende:	Dr. Temme, Sebastian [Gutachter] Prof. Dr. rer. nat. Gerdes, Norbert [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Monozyten tragen zur Immunabwehr von Pathogenen und zur Bekämpfung steriler Ent-zündlicher Erkrankungen bei. Die Funktionalität der Monozyten und auch der Monozyten-subpopulationen kann durch eine Interaktion mit Thrombozyten beeinflusst werden, dies ist jedoch bisher wenig erforscht ist. Das Hauptziel dieser Arbeit war zum einen die Etab-lierung einer zuverlässigen Untersuchungsweise der Monozyten-Plättchen-Aggregate (MPAs) mittels Durchflusszytometrie und die anschließende Exploration unterschiedlicher phänotypischer und funktioneller Aspekte dieser, insbesondere die Expression von Ober-flächenrezeptoren und die Fähigkeit zur Phagozytose. In einem weiteren Schritt wurde analysiert, inwieweit sich die Ausbildung der Monozyten-Plättchen-Aggregate und die zu-vor genannten funktionellen Aspekte in einer entzündlichen Situation verändern könnten. Als erstes wurden drei verschiedene Methoden zur Darstellung der Monozytensubpopula-tionen anhand Blutproben gesunder junger Spender erprobt. Zuerst wurden die Proben gegen CD11b, CD14 und CD16 gefärbt. Ein alternativer Versuchsansatz ergänzte diese mit einer Färbung der Proben gegen CD3, CD209 und CD19. Bei diesen beiden Strategien zeigte sich jedoch eine Kontamination der nicht-klassischen Monozyten mit NK-Zellen. Eine weitere Färbung gegen CD11b, CD14, CD16 und MHC-II ermöglichte eine zuverlässige und kontaminationsfreie Darstellung der drei Monozytensubpopulationen, sodass diese Strategie im Folgenden genutzt wurde. Mit einer zusätzlichen Färbung der Blutproben gegen den CD41 konnten dann mit Plättchen assoziierte Monozyten dargestellt werden. Zudem wurden sowohl Plättchen als auch Monozyten auf ihre Expression von Oberflächen-rezeptoren im unstimulierten und stimulierten Zustand untersucht. Es zeigte sich ein An-stieg der Expression von P-Selektin auf der Oberfläche der Plättchen nach Stimulation mit Adenosindiphosphat (APD), während die Expression von PSGL-1 auf der Oberfläche der Monozyten nach einer Stimulation mit Lipopolysaccharid (LPS) abnahm. Zur Analyse der Phagozytosefähigkeit von Monozyten und Monozyten-Plättchen-Aggregaten wurden Lipid-nanopartikel genutzt, welche von den Monozyten aufgenommen und so durchflusszyto-metrisch detektiert werden können. Es konnte eine Zunahme der Phagozytose von Lipid-nanopartikeln von plättchengebundenen Monozyten festgestellt werden. Die Aufnahme von Lipidnanopartikeln konnte auch fluoreszenzmikroskopisch am Modell der THP-1 Zellen nachgewiesen werden. Zur Simulation entzündlicher Bedingungen wurden Blutproben mit LPS stimuliert. Die Einteilung der Monozytensubpopulationen mit CD14 und CD16 zeigte sich hier jedoch nicht anwendbar, da sowohl CD14 als auch CD16 starken Veränderungen nach Stimulation mit LPS unterliegen, sodass eine alternative Markierung gegen CCR2 und MHC-II zur Darstellung der Subpopulationen gewählt wurde. Es konnten keine wesentli-chen Unterschiede hinsichtlich der Verteilung der Subpopulationen nach LPS-Stimulation detektiert werden. Die Aggregatbildung und Aufnahme von Lipidnanopartikeln zeigten sich nach LPS-Stimulation abgeschwächt. Anhand der Ergebnisse dieser Arbeit lässt sich schlussfolgern, dass der Einsatz von CD11b, CD14, CD16 und MHC-II eine präzise Darstellung von Monozytensubpopulationen und da-mit auch der Monozyten-Plättchen-Aggregate erlaubt. Dies ermöglicht die präzise phäno-typische und funktionelle Untersuchung dieser Zellen. Monozyten-Plättchen-Aggregate von jungen gesunden Spendern unterscheiden sich nicht hinsichtlich der Expression von Oberflächenrezeptoren, jedoch weisen sie eine höhere Aufnahme von Lipidnanopartikeln auf. Mit der entwickelten Darstellungsmethode der Monozyten und MPAs lassen sich in Zukunft Monozyten und MPAs bei entzündlichen Erkrankungen untersuchen, um deren Rolle bei der Pathogenes aufzukläten. Monocytes contribute to the immune defense against pathogens and to the fight against sterile inflammatory diseases. The functionality of monocytes and monocyte subpopula-tions is influenced, among other things, by interaction with platelets, which has been little researched to date. The main objective of this work was to establish a reliable method for investigating monocyte-platelet aggregates using flow cytometry and to sub-sequently explore various functional aspects of these aggregates, in particular the expres-sion of surface receptors and the ability to phagocytose. In a further step, we analyzed the extent to which the formation of monocyte-platelet aggregates and the aforementioned functional aspects could change in an inflammatory situation. First, three different methods for representing monocyte subpopulations in the blood of healthy young donors were tested. First, the samples were stained against CD11b, CD14, and CD16. An alternative experimental approach supplemented this with staining of the samples against CD3, CD209, and CD19. These two strategies revealed contamination of non-classical monocytes with NK cells. A different staining against CD11b, CD14, CD16, and MHC-II enabled reliable and contamination-free visualization of the three monocyte sub-populations, therefore this strategy was used in the following. With additional staining of the blood samples against CD41, platelet-bound monocytes could be visualized. In addi-tion, both platelets and monocytes were examined for their expression of surface recep-tors in unstimulated and stimulated states. An increase in the expression of P-selectin on the surface of platelets was observed after stimulation with adenosine diphosphate (APD), while the expression of PSGL-1 on the surface of monocytes decreased after stimulation with lipopolysaccharide (LPS). Lipid nanoparticles were used to analyze the phagocytic capacity of monocytes and monocyte-platelet aggregates, which can be taken up by mon-ocytes and thus detected by flow cytometry. An increase in the phagocytosis of lipid na-noparticles by platelet-bound monocytes was observed. The uptake of lipid nanoparticles was also detected by fluorescence microscopy in the THP-1 cell model. To simulate in-flammatory conditions, blood samples were stimulated with LPS. However, the classifica-tion of monocyte subpopulations with CD14 and CD16 was not applicable here, as both CD14 and CD16 undergo significant changes after stimulation with LPS, so an alternative marker against CCR2 and MHC-II was chosen to represent the subpopulations. No signifi-cant differences in the distribution of subpopulations after LPS stimulation could be de-tected. Aggregation and uptake of lipid nanoparticles were attenuated after LPS stimula-tion. Based on the results of this study, it can be concluded that the use of CD11b, CD14, CD16, and MHC-II allows for a precise representation of monocyte subpopulations and thus also of monocyte-platelet complexes, enabling further phenotypic and functional investiga-tions. Monocyte-platelet aggregates from young healthy donors do not differ in terms of surface receptor expression, but they do show higher uptake of lipid nanoparticles. Based on these results, monocyte-platelet aggregates could play a crucial role in the pathogene-sis and control of various diseases.
Lizenz:	Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	09.03.2026
Dateien geändert am:	09.03.2026
Promotionsantrag am:	22.08.2025
Datum der Promotion:	26.02.2026