Dokument: Tandem-LTα-LTβ-Release in einem iRhom2-/TACE-defizienten System

Titel:	Tandem-LTα-LTβ-Release in einem iRhom2-/TACE-defizienten System
Weiterer Titel:	Tandem-LTα-LTβ-Release in an iRhom2-/TACE-deficient System
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=69593
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20250512-124546-1
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Jonas, Marius [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 4,04 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 07.05.2025 / geändert 07.05.2025
Beitragende:	Prof. Dr. Jürgen Scheller [Gutachter] Prof. Dr. MacKenzie, Colin [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Lymphotoxin α und Lymphotoxin β sind Zytokine aus der TNF-Superfamilie. Ein Komplex aus den Enzymen iRhom2 und ADAM17 trennt Lymphotoxin β von der Zellmembran ab und überführt es in seine lösliche Form. Lymphotoxin α hingegen liegt ausschließlich in löslicher Form vor, eine membrangebundene Form existiert nicht. Durch initiale Voruntersuchungen im Mausmodell konnte gezeigt werden, dass ein Knock-out von iRhom2 zu einer erheblich verringerten Sekretion von Lymphotoxin α führen kann. Im Rahmen dieser Arbeit sollte untersucht werden, wie dieser Effekt zu erklären ist. Zur Beantwortung dieser Frage gelang im Rahmen dieser Arbeit die Etablierung eines Sheddingassays zur Untersuchung der Sekretion des humanen und murinen Lymphotoxin α. Es konnte gezeigt werden, dass eine Hemmung von ADAM10 und ADAM17 zu einer verringerten Lymphotoxin α-Sekretion führt, was die Ergebnisse der Voruntersuchungen bestätigt und auf eine bislang nicht bekannt Interaktion von ADAM10 und ADAM17 hinweist. Zur genaueren Analyse erfolgte die Generierung von stabilen Zellen, die in der Lage sind, Lymphotoxin α und β in gleichen Mengen zu synthetisieren. In Kombination mit spezifisch generierten Plasmiden zur selektiven Expression von Lymphotoxin α oder Lymphotoxin β können diese genutzt werden, um die Mechanismen der Anlagerung der LTα- und LTβ-Monomere zu biologisch aktiven Trimeren zu untersuchen. Da derzeit der funktionelle Unterschied zwischen membranständigem und löslichem Lymphotoxin β unklar ist, erfolgte eine in silico-Analyse der Proteindomäne, in der bei Transmembrandomänen das Shedding stattfindet. Diese Region wird auch als Stalk-Region bezeichnet. Im Anschluss erfolgten Deletionen in unterschiedlichen Bereichen der Stalk-Region, die zur Analyse des Sheddings in weiterführenden Arbeiten genutzt werden können. Zusammenfassend konnte im Rahmen der vorliegenden Arbeit der Effekt einer Inhibition von ADAM17 bzw. iRhom2 auf die Lymphotoxin α-Sekretion experimentell nachgewiesen werden. Überdies fanden sich Hinweise auf eine Beteiligung von ADAM10 an der Regulierung der Expression von Lymphotoxin α und Lymphotoxin β. Die Ergebnisse dieser Arbeit tragen somit zum Verständnis der Signaltransduktion des Lymphotoxin-Systems sowie dessen Rolle bei der Leberregeneration bei. Lymphotoxin α and lymphotoxin β are cytokines from the TNF superfamily. A complex of the enzymes iRhom2 and ADAM17 separates lymphotoxin β from the cell membrane and converts it into its soluble form. Lymphotoxin α, on the other hand, is only present in soluble form; a membrane-bound form does not exist. Initial preliminary investigations in the mouse model showed that knocking out iRhom2 can lead to a significant reduction in the secretion of lymphotoxin α. The aim of this study was to investigate how this effect can be explained. To answer this question, a shedding assay was established to investigate the secretion of human and murine lymphotoxin α. It could be shown that inhibition of ADAM10 and ADAM17 leads to reduced lymphotoxin α secretion, which confirms the results of the preliminary investigations and indicates a previously unknown interaction of ADAM10 and ADAM17. Stable cells capable of synthesizing equal amounts of lymphotoxin α and β were generated for more detailed analysis. In combination with specifically generated plasmids for the selective expression of lymphotoxin α or lymphotoxin β, these can be used to investigate the mechanisms of attachment of LTα and LTβ monomers to biologically active trimers. Since the functional difference between membrane-bound and soluble lymphotoxin β is currently unclear, an in silico analysis of the protein domain where shedding occurs in transmembrane domains was performed. This region is also referred to as the stalk region. Subsequently, deletions were made in different areas of the stalk region, which can be used to analyze the shedding in further studies. In summary, the effect of inhibition of ADAM17 or iRhom2 on lymphotoxin α secretion was demonstrated experimentally in this study. Furthermore, evidence was found for the involvement of ADAM10 in the regulation of lymphotoxin α and lymphotoxin β expression. The results of this work thus contribute to the understanding of the signal transduction of the lymphotoxin system and its role in liver regeneration.
Lizenz:	Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Biochemie und Molekularbiologie II
Dokument erstellt am:	12.05.2025
Dateien geändert am:	12.05.2025
Promotionsantrag am:	16.06.2020
Datum der Promotion:	06.05.2025