Dokument: Die Bedeutung der Gallensalzrezeptoren S1PR2 und TGR5 bei Cholangiokarzinomen
| Titel: | Die Bedeutung der Gallensalzrezeptoren S1PR2 und TGR5 bei Cholangiokarzinomen | |||||||
| Weiterer Titel: | The role of bile salt receptors TGR5 and S1PR2 in cholangiocarcinoma | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=69366 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20250416-125529-0 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Jung, Justin [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. med. Keitel-Anselmino, Verena [Gutachter] Lübke, Nadine [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | TGR5, S1PR2, cholangiocarcinoma | |||||||
| Beschreibungen: | Diese Arbeit befasst sich mit der Rolle von Gallensalzrezeptoren bei Cholangiokarzinomen.
Das Cholangiokarzinom stellt eine meist tödliche, maligne Krankheit mit nur begrenzten Therapieoptionen der intra- und extrahepatischen Gallengänge dar. Risikofaktoren stellen Erkrankungen, die zu einer chronischen Inflammation sowie einer Cholestase mit Erhöhung der Serumgallensäuren führen, dar. Somit wird seit längerem eine Bedeutung von Gallensalzrezeptoren für die Pathogenese des Cholangiokarzinoms angenommen. Allerdings wurden in bisherigen Arbeiten die verschiedenen Gallensalzrezeptoren einzeln betrachtet. Ziel der aktuellen Arbeit war es, die Bedeutung der G-Protein gekoppelten Gallensäurerezeptoren S1PR2 und TGR5 für das Cholangiokarzinom zu untersuchen. Hierzu wurden Real-Time-PCR, Western Blot, und Immunfluoreszenzfärbungen von Cholangiokarzinomzelllinien, murinen Cholangiozyten, murinem Gewebe sowie humanem Cholangiokarzinomgewebe und den jeweiligen Kontrollgeweben durchgeführt. Eine Detektion von S1PR2 auf Proteinebene war durch Charakterisierung von zwei neuen anti-S1PR2 Antiseren möglich. Zur funktionellen Charakterisierung wurde der S1PR2- und TGR5-abhängige ERK-Signalweg untersucht. S1PR2 konnte ähnlich wie TGR5 in murinen und humanen Cholangiozyten sowie humanen Cholangiokarzinomzelllinien auf mRNA sowie Proteinebene nachgewiesen werden. Immunfluoreszenzfärbungen mit den anti-S1PR2 Antiseren ergaben ein überwiegend intrazelluläres Muster. Ein großer Teil des Rezeptors konnte im endoplasmatischen Retikulum sowie in weiteren intrazellulären vesikulären Strukturen nachgewiesen werden. Im Vergleich zu TGR5 fanden sich in den verschiedenen CCC Zelllinien unterschiedliche Expressionstärken für S1PR2. Eine Stimulation mit Taurocholsäure als endogenem Liganden für sowohl TGR5, als auch S1PR2 sowie einen S1PR2 spezifischen Inhibitor ergaben eine zelltyp-spezifische Regulation von S1PR2. Im humanen CCC Gewebe waren beide Rezeptoren im Vergleich zum nicht-tumorösen Randgewebe überexprimiert. Entsprechend könnten Gallensäuren über beide Rezeptoren zur Progression des CCC beitragen. In TGR5-defizienten murinen Cholangiozyten sowie einer TGR5-defizienten CCC Zelllinie fand sich eine Hochregulation der S1PR2 Expression, was auf eine essentielle, redundante Funktion beider Rezeptoren sowohl unter physiologischen, als auch malignen Bedingungen, schließen lässt. Weitere Arbeiten an TGR5 sowie S1PR2 doppeldefizienten Zelllinien und Tieren werden diese Frage beantworten können.The aim of this work was to investigate the role of bile salt receptors in cholangiocarcinoma. Cholangiocarcinoma is a mostly fatal, malignant disease originating from the intra- and extrahepatic bile ducts with only limited treatment options. Among the risk factors are diseases leading to chronic inflammation as well as cholestasis with an increase in serum bile acids. It has therefore long been assumed that bile salt receptors are important in the pathogenesis of cholangiocarcinomas. However, previous studies have only looked at the various bile salt receptors individually. The aim of the current study was to investigate the significance of the G-protein-coupled bile acid receptors S1PR2 and TGR5 in cholangiocarcinoma. Real-time-PCR, Western blot, and immunofluorescence staining of cholangiocarcinoma cell lines, murine cholangiocytes, murine tissue as well as human cholangiocarcinoma tissue and the responding control tissues, were performed. Detection of S1PR2 at the protein level was possible by characterization of two new anti-S1PR2 antisera. For functional characterization, the S1PR2- and TGR5-dependent ERK signaling pathway was investigated. Similar to TGR5, S1PR2 could be detected in murine and human cholangiocytes as well as in human cholangiocarcinoma cell lines on a mRNA and protein level. Immunofluorescence staining with the anti-S1PR2 antisera revealed a predominantly intracellular pattern. A large part of the receptor could be detected in the endoplasmic reticulum as well as in other intracellular vesicular structures. Compared to TGR5, various expression levels for S1PR2 were found in different CCC cell lines. Stimulation with taurocholic acid as an endogenous ligand for both receptors and an S1PR2-specific inhibitor resulted in a cell type-specific regulation of S1PR2. In human CCC tissue, both receptors were overexpressed compared to the non-tumorous marginal tissue. Accordingly, bile acids stimulate both receptors and therefore may contribute to CCC progression. Understanding this mechanism may allow for therapeutic interventions in the future. In TGR5-deficient murine cholangiocytes and in a TGR5-deficient CCC cell line, the S1PR2 expression was found to be upregulated, suggesting an essential, redundant function of both receptors in normal as well as in malignant cholangiocytes. Further work on TGR5 as well as S1PR2 double-deficient cell lines and in animals will answer whether both receptors are essential for cholangiocyte physiology and/or cholangiocarcinoma pathogenesis. | |||||||
| Lizenz: |  Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät | |||||||
| Dokument erstellt am: | 16.04.2025 | |||||||
| Dateien geändert am: | 16.04.2025 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 29.09.2024 | |||||||
| Datum der Promotion: | 25.03.2025 |
