Dokument: Evaluation der murinen Augenoberfläche nach experimentell induziertem trockenem Auge
| Titel: | Evaluation der murinen Augenoberfläche nach experimentell induziertem trockenem Auge | |||||||
| Weiterer Titel: | Evaluation of murine eye surface after experimentally induced dry eye syndrome | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=64369 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20231218-085954-5 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Ott, Lolita [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Dr. Schrader, Stefan [Gutachter] Prof. Dr. von Gall, Charlotte [Gutachter] | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit | |||||||
| Beschreibungen: | Das trockene Auge (auch: Dry Eye Desease, DED) ist weltweit eine der häufigsten Erkrankungen der Augenoberfläche. Der Untergang von funktionellem Tränendrüsengewebe gilt als eine der Hauptursachen für die Entwicklung der hypovolämischen Form des DED (auch: Aqueous-Deficient Dry Eye, ADDE). Es sorgt bei Betroffenen für eine erhebliche Einschränkung der Lebensqualität und es existieren bis zum jetzigen Zeitpunkt keine kurativen Therapieansätze. Ein potenzieller Behandlungsansatz stellt die Regeneration des geschädigten Tränendrüsengewebes mittels mesenchymaler Stammzellen (MSC) dar. Der therapeutische Nutzen dieser Zellen wurde bereits in vielen Studien beschrieben sowie in den Vorarbeiten der Arbeitsgruppe nachgewiesen. Ziel dieser Studie war es, mögliche Auswirkungen der in die Tränendrüse transplantierten MSC auf die murine Augenoberfläche nach zuvor induziertem ADDE zu evaluieren.
In den Vorstudien wurde bereits ein murines in vivo Schädigungsmodell der Tränendrüse zur Auslösung einer ADDE etabliert, welches auch in dieser Studie angewendet wurde. Mittels einer Ductus-Ligatur der rechten Tränendrüse wurde ein Untergang von funktionellem Tränendrüsengewebe induziert. Nach 3 Tagen wurde die Ligatur wiedereröffnet und primäre murine MSC aus männlichen Tieren bzw. NaCl bei der Kontrollgruppe wurden in die Tränendrüse injiziert. Es erfolgte eine Beurteilung der murinen Augenoberfläche am Tag der Ductus-Eröffnung (Tag 0), Tag 5 und Tag 21 nach Eröffnung. Die Beurteilung der Augenoberfläche wurde zum einem in vivo mittels Fluoreszein-Färbung durchgeführt, zum anderen mittels Immunhistochemie, histologischer Färbungen mittels Hämatoxylin-Eosin (Beurteilung der kornealen epithelialen Zelldicke und Schichten) und PAS- Reaktion (Darstellung muzinbildender Becherzellen). Als immunhistochemische Marker kamen zum Einsatz Antikörper gegen Immunzellen, der MSC sowie Epithelzellen, Apoptose und Proliferation. Die Untersuchung der Augenoberfläche zeigte eine deutliche Schädigung durch die Ductus- Ligatur, welche sich insbesondere in einer Abnahme der Epithelzelldicke, der Becherzellzahl und einer Zunahme von apoptotischen Zellen darstellte. Zudem konnte man im Zuge eines Inflammationsprozesses eine Zunahme der Granulozyten (Ly6G+) in der NaCl-Gruppe an Tag 5 beobachten. Diese Schädigung ließ sich jedoch nur auf einer histologischen Ebene beobachten, makroskopisch konnte kein signifikanter Unterschied verzeichnet werden. Auf der Augenoberfläche konnten zudem anhand der Marker (GFP, Nestin) keine MSC nachgewiesen werden. Es zeigte sich in den MSC-Gruppen einen Anstieg der Zelldicke und Zellschichten an Tag 5 im Vergleich zu Tag 21, sowie insgesamt weniger apoptotische und Ly6G-positive Zellen im Vergleich zu den Kontrollgruppen. Dies lässt Rückschlüsse über ein frühes regeneratives therapeutisches Potential der MSCs für die Augenoberfläche bei einer geschädigten Tränendrüse zu.The Dry Eye Syndrome or Dry Eye Disease (DES, DED) is one of the most common diseases of the ocular surface. Damaged functional lacrimal gland (LG) tissue is considered as one of the main courses of a severe aqueous-deficient dry eye (ADDE). Patients suffer from a significant loss of life quality and there are no known curative therapy options to date. One promising therapy could be the regeneration of the LG by mesenchymal stem cells (MSC). These cells are known for their regenerative potential, which was confirmed in many studies and in previous projects of our research group. The purpose of this study was to evaluate the effects of transplanted MSC on the murine ocular surface after an experimentally induced ADDE. Therefore, our research group has already established an in vivo mouse model of the DED based on a damaged lacrimal gland. This is based on a ligation of the right lacrimal gland ductus, which then causes a tissue damage of the LG. After 3 days the ligature was re-opened and murine MSC of male mice were injected into the damaged LG in one group, whereas the control group received a saline injection. Hereinafter, the murine ocular surface was investigated on day 0 (day of the opening of the ligature), day 5 and day 21. This was performed via in vivo fluorescein staining and additionally ex vivo with immunohistochemistry and histological staining with hematoxylin and eosin (observation of the corneal epithelial thickness and cell numbers) as well as PAS-staining (goblet cells of the conjunctiva). For immunohistochemistry, markers against inflammation, MSC, epithelial cells, apoptosis and proliferation were used. The evaluation of the ocular surface revealed a visible damage due to the ductus ligature. This was especially seen in the loss of corneal epithelial thickness, loss of goblet cells and increasing numbers of apoptotic cells. Additionally, we could detect an increase of granulocytes (Ly6G+) in the saline group at day 5, which could be due to an inflammatory process. These damage signs were only on a histological level detectable, and we could not detect any remarkable differences by using fluorescein staining. In addition, no MSC could be found on the eye surface based on the used markers (anti-GFP, anti-Nestin). In the MSC groups we noticed a significant increase of the corneal epithelia cells layer and cell number on day 5 compared to day 21, also there were less apoptotic cells and granulocytes in MSC groups than in saline groups. This can be considered as an indication for an early regenerative therapeutical potential of the MSC on the ocular surface after previously damaged lacrimal gland. | |||||||
| Lizenz: |  Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät | |||||||
| Dokument erstellt am: | 18.12.2023 | |||||||
| Dateien geändert am: | 18.12.2023 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 01.10.2017 | |||||||
| Datum der Promotion: | 30.11.2023 |
