Dokument: Der Einfluss von GLEPP1 auf das Zytoskelett des Podozyten

Titel:	Der Einfluss von GLEPP1 auf das Zytoskelett des Podozyten
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=61026
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20221107-090155-9
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Gerbaulet-Helling, Laura [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,53 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 26.10.2022 / geändert 26.10.2022
Beitragende:	Prof. Dr. Sellin, Lorenz [Gutachter] Prof. Dr. Niegisch, Günter [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	In den letzten Jahren wurden wichtige neue Erkenntnisse bezüglich des genauen Aufbaus der podozytären Schlitzmembran gewonnen. Daraus ließ sich ein neues Verständnis der glomerulären Schlitzmembran und der Pathogenese von vielen, mit Proteinurie assoziierten Nierenerkrankungen ableiten. Aufgrund der Anpassung der podozytären Fußfortsätze an Einflüsse aus der Umgebung wird der glomeruläre Filter nicht mehr als statisches Konstrukt angesehen, sondern als dynamisches Modell. Ziel dieser Arbeit ist es, GLEPP1 (glomerular epithelial protein-1) und seine Interaktionspartner und deren Funktion für den Podozyten zu untersuchen. Methodisch wurden unterschiedliche Ansätze verfolgt. Zum einen die Co- Immunopräzipitation zum Nachweis der Interaktion zwischen Proteinen, zum anderen die Immunfluoreszenz zur Darstellung von Proteinen und Zellstrukturen in unterschiedlichen Zellen. In vorherigen Arbeiten wurde gezeigt, dass GLEPP1 den Aufbau und die dynamischen Veränderungen der fokalen Adhäsionen modulieren kann. Wir bestätigten dies durch den Nachweis einer Interaktion von GLEPP1 mit Paxillin, einem wichtigen Protein der fokalen Adhäsionen. Die Interaktionsstellen von GLEPP1 mit Paxillin konnten durch Truncationmapping eingegrenzt werden. Unter Stimulation von FAK, einem wichtigen modulatorischen Protein der fokalen Adhäsionen, vermuten wir eine verstärkte Interaktion zwischen GLEPP1 und Paxillin. Durch die Inhibition von Src-Kinasen, die Paxillin phosphorylieren und dadurch die Zellmotilität beeinflussen, ließ sich die Tendenz einer verminderten Interaktion nachweisen. Ein weiterer modulatorischer Effekt auf die Interaktion von GLEPP1 und Paxillin scheint durch die Hinzugabe von Salicylsäure, die GLEPP1 hemmt, erreicht zu werden. Zur Untersuchung des Einflusses von GLEPP1 auf das Aktinzytoskelett wurde mittels Immunfluoreszenz die Zellstruktur in stabil transduzierten Zellen untersucht. Hier zeigte sich, dass GLEPP1 keinen direkten Einfluss auf die Modulation des Aktinzytoskeletts hat, jedoch zu einer verstärkten Ausbildung von fokalen Adhäsionen führt. Daher hat GLEPP1 offenbar einen indirekten Einfluss auf die Migration. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass GLEPP1 die Zellmigration beeinflusst und somit essenziell für die Anpassungsfähigkeit des Podozyten und die Organisation des zytoskelettalen Aufbaus ist. In recent years, new important insights have been gained regarding the construction of the podocyte slit diaphragm. This has resulted in a completely new understanding of the glomerular slit diaphragm and the pathogenesis of many proteinuria associated kidney diseases. Additionally, the glomerular filter is no longer considered a static construct, but instead as a dynamic model through the adaptation of the podocyte foot extension influenced by the environment. The goal of this dissertation was to investigate GLEPP1, its interaction partners and their function for the podocyte. Different approaches have been methodically used to perform co- immunoprecipitation to detect interactions between proteins. We also used immunofluorescence to visualize proteins and cell structures in different cells. A previous study demonstrated an interaction of GLEPP1 with paxillin, an important protein of focal adhesions. Interaction sites between GLEPP1 and paxillin was narrowed down using truncation mapping. Through the stimulation via FAK (focal adhesion associated kinase), an important modulatory protein of focal adhesions, an increased interaction between GLEPP1 and paxillin has been shown. Also, by inhibiting Src-Kinases, which phosphorylates paxillin and thereby affects cell motility, the interaction was weakened. Another modulatory effect on the interaction of GLEPP1 and paxillin was demonstrated by the addition of salicylic acid, which inhibits GLEPP1. To investigate the influence of GLEPP1 on the actin cytoskeleton, the cell structure in stably transduced cells was examined by immunofluorescence. This showed that GLEPP1 has no direct influence on the modulation of the actin cytoskeleton, but does lead to an increased formation of focal adhesions. Therefore, GLEEP1 appears to have an indirect impact on migration. To conclude, these findings have shown that GLEPP1 has an influence on cell migration and seems to be essential for the adaptability of the podocyte and the organization of the cytoskeletal structure.
Lizenz:	Dieses Werk ist lizenziert unter einer Creative Commons Namensnennung 4.0 International Lizenz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	07.11.2022
Dateien geändert am:	07.11.2022
Promotionsantrag am:	22.04.2022
Datum der Promotion:	18.10.2022