Dokument: Isolierung und Detektion von Bakterien und Pilzen aus wurzelgefüllten Zähnen bei Vorliegen einer postendodontischen apikalen Parodontitis

Titel:	Isolierung und Detektion von Bakterien und Pilzen aus wurzelgefüllten Zähnen bei Vorliegen einer postendodontischen apikalen Parodontitis
Weiterer Titel:	Isolation and detection of bacteria and fungi in root-filled teeth with secondary apical periodontitis
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=50188
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20190715-090333-6
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Al-Sakati, Hannah [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 3,07 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 11.07.2019 / geändert 11.07.2019
Beitragende:	Prof. Dr. Raab, Wolfgang H.-M. [Gutachter] Prof. Dr. med. Dr. med. dent. Rana, Majeed [Gutachter]
Stichwörter:	Zahnmedizin
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die Versagensrate endodontischer Behandlung wirft die Frage nach der mikrobiellen Besiedlung im therapierten Wurzelkanal auf. In den bisherigen Studien erfolgten die Probennahmen meist mittels steriler Papierspitzen. Es hat sich jedoch gezeigt, dass weitere Mikroorganismen teilweise nur im entfernten Guttapercha nachzuweisen sind. Ziel der vorliegenden Studie war die Isolierung und Detektion von Bakterien und Pilzen aus wurzelgefüllten Zähnen bei Vorliegen einer postendodontischen apikalen Parodontitis mithilfe eines molekulargenetischen Ansatzes im Vergleich zur Kultur. Im Zuge einer Revisionsbehandlung wurden an 42 Zähnen mit röntgenologisch sichtbarer apikaler Parodontitis jeweils drei Proben entnommen: (1) subgingivale Plaque, (2) Abstrich der präparierten Kavität nach Desinfektion (Desinfektionskontrolle) und (3) entferntes Wurzelfüllmaterial/Guttapercha. Die molekulargenetische Analyse erfolgte mittels Real-Time Pan-PCRs für Bakterien (16S rDNA als Zielsequenz) und Pilze (ITS 1+2 Regionen als Zielsequenzen). Anschließend wurden die PCR-Produkte Sanger-sequenziert und in einer BLAST-Analyse der jeweils erhaltenen Sequenz das dominante Pathogen identifiziert. Für den vergleichenden kulturellen Nachweis dienten Kochblut-, Schaedler- und Sabouraud-Festnährmedien. Die Kultur lieferte in 42/42 Plaque-Proben einen bakteriellen Nachweis. Streptococcus spp. (41/42 Proben) und Actinomyces spp. (38/42 Proben) wurden am häufigsten identifiziert. Nur in einer Probe konnte ein Pilz (Candida albicans) kulturell nachgewiesen werden. Mittels Pan-PCR konnte in 38/42 Plaqueproben ein dominantes Bakterium identifiziert werden, vor allem Streptococcus spp. (22/42 Proben). In 3/42 Proben wurden Pilze (Candida albicans) nachgewiesen. In 28/42 Wurzelfüllmaterial-Proben konnte mittels Kultur ein Keimnachweis erfolgen. Durchschnittlich ein bis zwei Bakterienspezies pro Wurzelfüllung wurden kulturell detektiert. Streptococcus spp. (10/42 Proben) und Enterococcus faecalis (9/42 Proben) traten am häufigsten auf. In der Wurzelfüllung konnten Pilze kulturell nicht nachgewiesen werden. Mittels Pan-16S PCR konnte im Wurzelfüllmaterial in 30/42 Proben ein dominantes Bakterium detektiert werden. Streptococcus spp. und E. faecalis (jeweils 4/42 Proben) wurden am häufigsten identifiziert. Nur mittels PCR war es möglich, in 5/42 Guttapercha-Proben Pilze nachzuweisen, in 4/5 Fällen Candida albicans. In 8/42 Wurzelfüllungen wurden schwer kultivierbare Bakterien (Synergistes, Acinetobacter, Atopobium, Pyramidobacter, Ruminococcus, Pseudoramibacter und Bacteroidetes) mittels Pan-16S PCR detektiert, die kulturell nicht nachgewiesen werden konnten. Die Ergebnisse der Studie zeigen, dass die Kultur ein geeignetes Verfahren zur Analyse der subgingivalen Plaque als polymikrobielles Gemisch darstellt, da es eine Detektion mehrerer Keime gleichzeitig ermöglicht. Im Gegenzug zeigt sich der Einsatz der PCR bei Vorhandensein eines dominanten, schwer anzüchtbaren Keims von deutlichem Vorteil und ist ebenfalls zur Pilzdiagnostik der Kultur überlegen. Die vorliegende Studie bestätigt, dass neben schwer kultivierbaren Bakterien insbesondere E. faecalis, C. albicans und Streptococcus spp. Leitkeime in reinfizierten wurzelgefüllten Zähnen darstellen. The large number of endodontic treatment failures raises the question of the microbial flora in reinfected root canals. In most previous studies root canal samples were collected using sterile paper points. However, it has been shown that some microorganisms can only be found on removed root filling material. The aim of the present study was to isolate and detect bacteria and fungi in reinfected root-filled teeth with secondary apical periodontitis using culture-dependent and culture-independent approaches. During each retreatment of 42 endodontically treated teeth with periapical lucency three samples were collected: (1) subgingival plaque, (2) swab sample of the prepared disinfected cavity (disinfection control) and (3) removed root filling material/Guttapercha. Real-Time Pan-PCRs were conducted for diagnosis of bacteria (16S rDNA as the target sequence) and fungi (ITS 1+2 regions as the target sequences). Afterwards, PCR products were sequenced through the Sanger method and with the sequence similarity tool BLAST the dominant pathogen of the sample was identified. Swab cultures were made on blood agar, Schaedler agar and Sabouraud dextrose agar plates. 42/42 plaque samples showed bacterial growth in culture. Among these, Streptococcus spp. (41/42 samples) and Actinomyces spp. (38/42 samples) prevailed. Cultivated fungi (Candida albicans) were only found in one plaque sample. By the use of Pan-PCR 38/42 plaque samples each revealed a predominant microorganism, primarily Streptococcus spp. (22/42 samples). Fungal infection (Candida albicans) was found in 3/42 samples. 28/42 root filling materials showed bacterial growth in culture. The average number of bacterial species cultured ranged from one to two species within a single sample. Streptococcus spp. (10/42 samples) and Enterococcus faecalis (9/42 samples) were detected in most cases. Fungi could not be detected in root canal fillings by culture methods. By Pan-16S PCR it was possible to identify predominant bacteria in 30/42 samples obtained after the removal of Guttapercha. Streptococcus spp. and E. faecalis (4/42 samples each) were most prevalent. It was only possible to detect fungi in Guttapercha by PCR analysis (5/42 samples), 4 out of 5 cases were positive for Candida albicans. 8/42 root canal samples showed colonization of difficult-to-cultivate bacteria (Synergistes, Acinetobacter, Atopobium, Pyramidobacter, Ruminococcus, Pseudoramibacter and Bacteroidetes) only by Pan-16S PCR and not by culture methods. These findings indicate that culture techniques are appropriate to analyze the polymicrobial composition of subgingival plaque as they allow the detection of a greater number of microorganisms simultaneously. In contrast, PCR analysis is significantly more effective than culture for the detection of dominant as well as difficult-to-cultivate pathogens and proved to be a more sensitive diagnostic method for fungal infection. This study confirms that besides difficult-to-cultivate bacteria primarily E. faecalis, C. albicans and Streptococcus spp. are the most prevalent pathogens in reinfected root-filled teeth.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	15.07.2019
Dateien geändert am:	15.07.2019
Promotionsantrag am:	27.11.2018
Datum der Promotion:	09.07.2019