Dokument: Effekte von NO auf die Expression des Bradykinin-Rezeptors Typ II in Mäusen und Zellen - eine experimentelle Studie

Titel:	Effekte von NO auf die Expression des Bradykinin-Rezeptors Typ II in Mäusen und Zellen - eine experimentelle Studie
Weiterer Titel:	Effects of NO on Bradykinin Receptor B2 Expression in Mice and Cells
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=50174
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20190710-114316-6
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Valcaccia, Sandra [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 4,89 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 10.07.2019 / geändert 10.07.2019
Beitragende:	Prof. Dr. Kojda, Georg [Gutachter] PD Dr. med. Stegbauer, Johannes [Gutachter]
Stichwörter:	Bradykinin-Rezeptor B2, NO
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die Aktivierung des Bradykininrezeptors Typ II (B2) führt zur Bildung von NO, Prostacyclin (PGI2) und des Endothel-derived hyperpolarizing factors (EDHF). Es ist noch nicht bekannt, ob diese Mediatoren umgekehrt auch die Expression von B2 beeinflussen, weshalb die Wirkung von NO auf die B2-Expression im Rahmen dieser Promotion untersucht werden sollte. Diese Frage hat eine besondere klinische Relevanz, denn wenn NO die B2-Expression beeinflusst, müsste die Verwendung der häufig eingesetzten Antihypertensiva aus der Gruppe der ACE-Hemmer und AT1-Blocker kritischer überdacht werden. Die Verwendung von ACE-Hemmern und AT1-Blockern verursacht durch die Hemmung des Angiotensin-Converting-Enzyms (ACE) regelmäßig einen erhöhten Bradykinin-Spiegel. Folglich steigt das Risiko, ein nicht allergisches Angioödem mit allen klinischen Komplikationen zu entwickeln, um ein Vielfaches. Es ist jedoch auch bekannt, dass die Verwendung von ACE-Inhibitoren und AT1-Blockern zu einer verbesserten Endothelfunktion führt, indem vermehrt NO zur Verfügung gestellt wird. Dies hat u.a. eine vasoprotektive Funktion und senkt den Blutdruck. Um eine mögliche Wechselwirkung zwischen Bradykinin und NO nachzuweisen, bestand der erste Schritt darin, den nativen B2-Proteingehalt in den Organen Herz und Lunge von eNOS-Knockout-Mäusen, eNOS++, eNOSn und C57BL/6 zu bestimmen. In weiteren Versuchen wurden die Mäuse dann entweder mit dem NO-Donor PETN oder mit dem NOS-Inhibitor L-NA behandelt, um mögliche Auswirkungen von erhöhten NO Spiegeln bzw. fehlendem NO auf den B2 aufzeigen zu können. Unbehandelte transgen-negative eNOSn Mäuse und C57BL/6 Mäuse dienten in allen Versuchen als Negativkontrollen. In den an PAEC durchgeführten in-vivo-Experimenten wurde ebenfalls der B2-Proteingehalt nativ und nach Behandlung mit den NO-Donatoren (SNAP oder DETA/NO) bestimmt. Auch der B2 Proteingehalt nach Behandlung mit dem NOS-Inhibitor (L-NA) wurde in den PAEC bestimmt. Die Behandlung der Zellen mit L-NA entsprach dabei dem akuten pharmakologischen Knockout, da alle NO-Isoformen durch die L-NA inhibiert werden und somit ein direkter Vergleich mit dem genetischen eNOS-Knockout möglich ist. Uns hat besonders interessiert, ob es Kompensationsmechanismen zwischen der eNOS und der B2 gibt und ob diese sich voneinander unterscheiden. In allen Experimenten konnte aber kein Einfluss von NO auf die B2-Expression nachgewiesen werden. Die B2-Expression blieb immer konstant. Es spielte keine Rolle, ob die Mäuse eNOS überexprimieren, die Expression normal ist oder, wie bei den eNOS-Knockout-Mäusen, komplett fehlt. Auch die Menge an verfügbarem NO spielte für die B2-Expression keine Rolle. Es machte keinen Unterschied, ob NO-Donatoren oder NOS-Inhibitoren eingesetzt wurden. Auch die genetisch bedingte 3,3-fach höhere eNOS Expression in eNOS++ Mäusen zeigte keinen Einfluss. In allen Fällen konnte kein Einfluss von NO auf die B2-Expression detektiert werden, so dass eine Interaktion sicher ausgeschlossen ist. Activation of the vascular bradykinin receptor type II (B2) leads to the formation of NO, prostacyclin (PGI2) and the endothelium-derived hyperpolarizing factor (EDHF). It is not yet known whether these mediators, conversely, also influence the expression of the B2, which is why the effect of NO on the B2 expression should be investigated within the framework of this doctoral thesis. This question also has special clinical relevance, because if NO influences B2 expression, the use of the frequently used antihypertensives ACE inhibitors and AT1 blockers would have to be reconsidered more critically. Because of the use of ACE inhibitors and AT1 blockers, the inhibition of the angiotensin converting enzyme (ACE) also regularly causes an increased bradykinin level. Consequently, the risk of developing non-allergic angioedema with all clinical complications increases many times over. It would then be necessary to reconsider more often whether alternative antihypertensives should be used more frequently to avoid the complications of acute life-threatening angioedema. However, it is also known that the use of ACE inhibitors and AT1 blockers leads to an improved endothelial function and as a result more NO is available, which brings about vasoprotective function and blood pressure reduction. In order to detect a possible interaction between bradykinin and NO, the first step was to determine the B2 protein content in the organs heart and lung of eNOS knockout mice, eNOS++, eNOSn and C57BL/6. In further experiments, the different animal lines were then treated either with the NO donor PETN or with the NOS Inhibitor L-NA, in order to be able to show possible effects of the missing NO on the B2. Untreated transgene-negative eNOS mice and C57BL/6 mice always served as negative controls. In addition to the in vivo experiments, B2 protein content was determined natively, after treatment with NO donors (SNAP or DETA/NO) or after treatment with a NOS inhibitor (L-NA) in in vitro experiments with porvine aortic endothelial cells (PAEC). The treatment of cells with L-NA corresponded to an acute pharmacological knockout, since all isoforms of NO are inhibited by the L-NA and thus allowed a direct comparison with the genetic eNOS knockout. We were particularly interested in whether there are compensation mechanisms between the eNOS and the B2 and whether they differ from each other in a pharmacological and a genetic knockout. In all experiments, no influence of NO on B2 expression could be demonstrated. The B2 expression always remained constant. It does not matter if the animals overexpress eNOS, the eNOS expression is normally high, or, as with the eNOS knockout animals, none at all. The amount of available NO played no role for B2 expression. It also does not matter if additional NO donors or NOS inhibitors are used.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	10.07.2019
Dateien geändert am:	10.07.2019
Promotionsantrag am:	13.02.2019
Datum der Promotion:	09.07.2019