Dokument: Quantifizierung von infektiösen rAAV-2-Partikeln und deren therapeutischer Einsatz bei nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinom- Zelllinien
| Titel: | Quantifizierung von infektiösen rAAV-2-Partikeln und deren therapeutischer Einsatz bei nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinom- Zelllinien | |||||||
| Weiterer Titel: | Quantification of infectious rAAV-2 particles and their application on NSCLC cell lines | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=4487 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20070508-145124-7 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Neukirchen, Judith [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | PD Dr. Kronenwett, Ralf [Gutachter] PD Dr. Hanenberg, Helmut [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | rAAV, NSCLC | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit | |||||||
| Beschreibung: | Rekombinante adeno-assoziierte Viren (rAAV) stellen einen interessanten Vektor für eine somatische Gentherapie bei angeborenen Erkrankungen und Tumoren dar. Ihr Einsatz erfordert zur exakten Dosierung eine zuverlässige Quantifizierung der infektiösen Viruspartikel. Viele der Standardverfahren sind jedoch zeitaufwendig und fehleranfällig. Daher etablierten wir eine quantitative real-time PCR für die Titration von infektiösen rAAV-2-Partikeln. Diese qPCR misst die doppelsträngige DNA (dsDNA) der Viren, die nach der Infektion der Zellen in den Zellkern gelangt sind und deren DNA transkibiert wird. Bei der Titration 30 verschiedener rAAV-2 Fraktionen ergab sich eine Schwankung der Werte um den Faktor 1,5 (SA 0,47) mit einem Variationskoeffizient von 31,3%. Die infektiösen Titer der qPCR wurden mit den Ergebnissen von Standardmethoden wie der FACS-Analyse oder des aufwendigeren infectious center assays (ICA) verglichen. Hier zeigte sich eine statistisch signifikante Korrelation über 7 log Stufen mit einem Korrelationskoeffizienten von r=0,99 bzw. 0,80 (p<0,001). Der Vorteil der qPCR besteht in der gleichzeitigen Quantifizierung infektiöser rAAV-2-Partikel von mehreren rAAV-2-Präparationen, unabhängig von einem bestimmten Markergen.
Der zweite Teil dieser Arbeit bestand aus dem präklinischen Einsatz von therapeutischen rAAV-2-Vektoren, die das Tumorsuppressorgen p53 in Zielzellen transferieren. P53 wurde gewählt, da es in vielen Tumoren Mutationen aufweist und eine wichtige Rolle bei der Tumorentstehung und Progression spielt. Im Zentrum stand die Frage, welche Effekte die Kombination mit einem neuen Medikament in der Tumortherapie, dem Proteasomen-Inhibitor Bortezomib, in nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzelllinien hervorruft. Dabei wurden mittels Viabilitäts-Assay, Colony long term assay, Apoptose-ELISA und Western Blot das Verhalten der Zellen nach der einzelnen und kombinierten Behandlung mit rAAV-p53 und Bortezomib untersucht. Die zytotoxischen Eigenschaften der einzelnen Substanzen zeigten bei der Kombination synergistische Effekte. So wurde das Tumorzellwachstum abhängig von der Zelllinie um bis zu 82% (SA 5,70%) im Vergleich zu der unbehandelten Kontrolle gehemmt und die Apoptoserate signifikant bis um den Faktor 14,47 (SA 2,38) gesteigert (p<0,001). In einem klonogenen Langzeit-Assay bildeten kombiniert behandelte Zellen 58%-81% weniger Kolonien als die unbehandelten Zellen. Im Gegensatz zu rAAV-p53 hatte der Kontrollvektor rAAV-GFP keinen Einfluss auf das Zellwachstum. Durch die Transfektion der Zellen mit rAAV-p53 zeigte sich eine Zunahme der p53-Proteinexpression, die durch die Koinkubation mit Bortezomib noch verstärkt wurde. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass bei der Therapie des Bronchialkarzinoms die Restitution bzw. Erhöhung der p53-Expression in einem multimodalen Ansatz therapeutisch sinnvoll erscheint. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät | |||||||
| Dokument erstellt am: | 07.05.2007 | |||||||
| Dateien geändert am: | 07.05.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 17.08.2006 | |||||||
| Datum der Promotion: | 06.03.2007 |
