Dokument: Funktionelle Testung von Kandidatengenen an primären Fibroblasten von Patienten mit Fanconi-Anämie

Titel:	Funktionelle Testung von Kandidatengenen an primären Fibroblasten von Patienten mit Fanconi-Anämie
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=4246
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20070411-110033-6
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Velleuer, Eunike [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 10,92 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 10.04.2007 / geändert 10.04.2007
Beitragende:	PD Dr. Hanenberg, Helmut [Betreuer/Doktorvater] Prof. Dr. Haas, Rainer [Gutachter] Prof. Dr. Royer-Pokora, Brigitte [Gutachter]
Stichwörter:	Fanconi-Anämie, DNA-Reparatur, Zellzyklus, RAD5, Mitomycin C, retroviraler Gentransfer, Gentherapie
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Fanconi-Anämie (FA) ist eine genetisch und phänotypisch sehr heterogene autosomal und x-chromosomal rezessive Erkrankung. Sie wird klinisch charakterisiert durch die Trias aus kongenitalen Fehlbildungen, einem chronisch progredientem Versagen der Hämatopoese und einer erhöhten Inzidenz von Malignomen. Auf zellulärer Ebene ist die FA durch eine erhöhte spontane Chromosomenbrüchigkeit sowie eine Hypersensitivität gegenüber DNA-quervernetzende Reagenzien charakterisiert. Bei der FA existieren mindestens 13 verschiedene Komplementationsgruppen (FA-A, -B, -C, -D1, -D2, -E, -F, -G, -I, -J, -L, -M, -nonJ), von denen bisher 11 Gene (FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1/BRCA2, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCJ, FANCL, FANCM) identifiziert wurden. Zellbiologische und biochemische Untersuchungen zeigen, dass diese FA-Proteine bei der Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen miteinander verschiedene Funktionskomplexe bilden, daneben aber auch mit anderen Schlüsselproteinen wie ATM, BRCA1 oder Rad51 direkt interagieren. Diese Arbeit hatte zwei unterschiedliche Schwerpunkte. Einerseits wurden neu diagnostizierte Patienten retroviral typisiert, d.h. es wurde versucht, sie durch Überexpression des jeweiligen FA-Gens einer der bereits bekannten Komplementationsgruppen zuzuordnen. Bei zwei von 12 untersuchten Patienten konnte die klinische Verdachtsdiagnose FA auf zellulärer Ebene nicht bestätigt werden. Die anderen 10 Patienten verteilten sich überwiegend auf die beiden Komplementationsgruppen FA-A und FA-D2, wobei der Subtyp FA-D2 deutlich überrepräsentiert war. Hier konnte die zurzeit einzige bekannte lebende Patientin der Gruppe FA-L identifiziert werden. Diese Patientin verfügte über ein beginnendes Mosaik in der Hämatopoese vor Transplantation und fiel klinisch durch einen sehr ausgeprägten Phänotyp mit Kleinwuchs auf und entwickelte Mundhöhlenkrebs schon mit 13 Jahren. Das zweite Ziel dieser Untersuchung war, Kandidatengene für FA anhand der noch nicht klassifizierten Patienten zu untersuchen. Die gewählten Kandidatengene sind alle DNA-Reparaturgene, die in der homologen Rekombination involviert sind und zum Teil in Knock-out-Mäusen eine Überempfindlichkeit gegenüber Mitomycin C zeigen. Nach der Klonierung dieser Kandidatengene in retrovirale Vektoren wurden primäre Fibroblasten von Patienten mit Defekten in unbekannten Genen damit transduziert. Im Folgenden wurden sie analog zum Subtypisierungsprotokoll mit der DNA-quervernetzenden Substanz MMC behandelt und ihr Zellzyklusverhalten in der Durchflusszytometrie analysiert. Keines der hier untersuchten Gene konnte die FA-Zellen komplementieren, d.h. den durch die Behandlung mit MMC induzierten G2/MArrest aufheben. Somit wurde der Nachweis geführt, dass es sich bei keinem der hier untersuchten Kandidatengene in den untersuchten FA-Zellen um ein Fanconi-Anämie-Gen handelt.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	10.04.2007
Dateien geändert am:	10.04.2007
Promotionsantrag am:	01.08.2004
Datum der Promotion:	24.01.2007