Dokument: Strukturelle und funktionelle Untersuchungen des Transducers HtrII aus Natronomonas pharaonis und von HtrII/Tar-Chimären
| Titel: | Strukturelle und funktionelle Untersuchungen des Transducers HtrII aus Natronomonas pharaonis und von HtrII/Tar-Chimären | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3619 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20070216-143214-8 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Mennes, Nadine [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Büldt, Georg [Gutachter] Prof. Dr. Willbold, Dieter [Gutachter] PD Dr. Engelhard, Martin [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Halobakterieller Transducer, Chimäre, Signaltransduktion, Phototaxis, Sensorrhodopsin, Chemotaxis, Archaea, heterologe Expression | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibung: | Das halophile Archaebakterium Natronomonas pharaonis besitzt die Fähigkeit zur Phototaxis. Das Lichtsignal wird von dem sensorischen Rhodopsin NpSRII wahrgenommen und auf den Photo-Transducer NpHtrII übertragen, wodurch es zu einer photophoben Antwort auf blaues Licht kommt. Der NpHtrII wurde erfolgreich heterolog im Bakterium E. coli mit einer Ausbeute von ca. 0,6 0,9 mg/L Zellkultur exprimiert und nachfolgend mit biochemischen und biophysikalischen Methoden charakterisiert. Durch ITC- und Photozyklus Messungen konnte eine Bindung des sensorischen Rezeptors NpSRII an NpHtrII nachgewiesen werden. CD- und FTIR Messungen zeigen dabei einen hohen alpha-helikalen Sekundärstruktur-Anteil. Untersuchungen durch Größenausschluss-Chromatographie lieferten Hinweise auf eine Oligomerisierung der Transducer-Moleküle. Mittels ortsspezifischer Spinmarkierung und ESR-Spektroskopie konnte eine coiled-coil bzw. eine 4-Helix-Bündel Struktur für den Interaktionsbereich des Transducers mit der nachgeschalteten Histidin-Kinase CheA bestätigt werden. Zudem ließen sich erste Hinweise auf reizinduzierte Änderungen der Protein-Dynamik in der Signaldomäne beobachten, wodurch erste Hinweise auf den Mechanismus der intra- und intermolekularen Signalweiterleitung durch Konformationsänderungen erhalten wurden. Auf Grundlage der großen Homologie zwischen der archaebakteriellen Phototaxis und der eubakteriellen Chemotaxis wurden im Weiteren Chimären entwickelt, die aus dem N-terminalen Bereich des NpHtrII fusioniert mit dem C-terminalen Bereich des Tar-Rezeptors aus E. coli bestehen. Eine Charakterisierung dieser Fusionsproteine wurde ebenfalls mit Hilfe von ESR-Messungen und Funktionalitätsuntersuchungen durchgeführt. Zu letzteren gehörten ein in vitro Phosphorylierungs-Assay und ein in vivo Schwimmversuch zur Etablierung eines Modellsystems der Phototaxis im Bakterium E. coli. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 22.01.2007 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 18.01.2007 | |||||||
| Datum der Promotion: | 18.01.2007 |
