Dokument: Dom34p als Regulator der Protein-O-Mannosylierung bei Candida albicans

Titel:	Dom34p als Regulator der Protein-O-Mannosylierung bei Candida albicans
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3389
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20060512-001389-7
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Kluge, Sven [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,77 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Ernst, Joachim F. [Gutachter] Prof. Dr. Bünemann, Hans [Gutachter]
Stichwörter:	Candida albicans, O-Glykosylierung, Dom34p, Proteinmannosyltransferasen, Regulator, Mannosylierung
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:	Das Dom34-Protein ist ein in Eukaryoten und in Archaebakterien konserviertes Protein, das in verschiedene zelluläre Prozesse involviert ist. In der Hefe Saccharomyces cerevisiae konnte eine Beteiligung von Dom34p an Translation, Filamentbildung und der O-Glykosylierung nachgewiesen werden. Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die Bedeutung des DOM34-Genproduktes des humanpathogenen Pilzes Candida albicans auf die Wachstumseigenschaften und O-Glykosylierung zu charakterisieren. Insbesondere sollte das funktionelle Verhältnis von Dom34p zu der Proteinmannosyl-Transferase-1 (Pmt1p) charakterisiert werden. Nach der Disruption des DOM34-Gens in verschiedenen Stammhintergründen konnte bei der Charakterisierung der Mutanten festgestellt werden, dass eine dom34Δ/dom34Δ-Mutante Wachstumsdefekte bei einer Temperatur von 42 °C zeigt. Bei 37 °C ist die Deletionsmutante besonders sensitiv gegenüber Zellwand-destabilisierenden Substanzen, Azol-Antimykotika und Hygromycin B. Auch das Glykosylierungsmuster des sekretorischen Proteins Rbt51p ist in der dom34Δ/dom34Δ-Mutante verändert. Eine Phosphorylierung des Dom34-Proteins konnte bei 37 °C, nicht aber bei einer Temperatur von 42 °C nachgewiesen werden. Im Gegensatz zu S. cerevisiae, wo sich synthetische Phänotypen der pmt1Δ- und dom34Δ-Deletionen zeigten, konnte bei C. albicans eine Suppression von pmt1Δ-Phänotypen durch eine Deletion des DOM34-Gens erzielt werden. Verschiedene Defekte einer pmt1Δ/pmt1Δ-Mutante, wie Sensitivitäten gegenüber Zellwand-destabilisierenden Substanzen und AlCl3, aber auch Defekte der Flokkulation, der Zelloberflächenhydrophobizität und der Morphogenese der Einzeldeletionsmutante wurden in einer Dopppeldeletionsmutante aufgehoben. Es erfolgte eine Teilsuppression der veränderten Zellwandzusammensetzung einer pmt1Δ-Mutante. Weiterhin wurden O-Glykosylierungsdefekte verschiedener Zellwandproteine, die in einer pmt1Δ/pmt1Δ-Mutante auftreten, supprimiert. Um zu untersuchen, ob eine dom34-Mutation auch Mutationen anderer PMT-Gene beeinflussen kann, wurden heterozygote pmtΔ-Mutationen in einem dom34Δ/dom34Δ-Stammhintergrund generiert und charakterisiert. Es zeigte sich, dass genetische Interaktionen nicht nur zwischen DOM34 und PMT1, sondern auch zwischen DOM34 und Genen für andere Pmt-Isoformen, besonders PMT5, auftreten. Anders als im Fall von pmt1-Mutationen, verstärkt eine dom34-Mutation die pmt5-Phänotypen. Diese Ergebnisse sprechen dafür, dass Dom34p Pmt-Funktionen blockieren, aber auch aktivieren kann. Eine vergleichende Transkriptomanalyse der Mutanten ergab, dass bei den dom34Δ- und pmt1Δ-Einzeldeletionsmutanten Gene, die in die Zellwand-Biogenese involviert sind, stärker exprimiert werden. Auch Gene, die eine Rolle bei der Ausschleusung von Antimykotika aus der Zelle besitzen, sind stärker exprimiert. Das Transkriptom der Doppeldeletionsmutante kam von allen Mutanten dem des Wildtyps am nächsten. Somit bestätigen die Transkriptomdaten die Suppression der pmt1Δ-Phänotypen durch die Deletion von DOM34. Die Ergebnisse lassen vermuten, dass dem Dom34-Protein eine positive oder negative Regulationsfunktion für die Aktivität der fünf Isoformen der Protein-O-Mannosyltransferase von C. albicans zukommt, wobei die Ebene der Regulation noch offen bleibt.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	12.05.2006
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	28.04.2006
Datum der Promotion:	28.04.2006