Dokument: Molekulare Charakterisierung Tumor-assoziierter Kandidatengene in gynaekologischen Tumoren

Titel:	Molekulare Charakterisierung Tumor-assoziierter Kandidatengene in gynaekologischen Tumoren
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3323
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20060206-001323-7
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Czystowska, Malgorzata [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 3,05 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Dall, Peter [Gutachter] Prof. Dr. Wunderlich, Frank [Gutachter]
Stichwörter:	IGFBP-4, IGF, insulin-like growth factor, Tumorsuppressorgen, gynaekologische Tumore, Ovarialkarzinom, electronic Northern, differentiell exprimierte Gene, LOH, Promotor-HypermethylierungIGFBP-4, IGF, insulin-like growth factor, tumor suppressor gene, gynaecological tumors, ovarian cancer, electronic Northern, differentially expressed genes, LOH, promoter hypermethylation
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	Durch einen bio-informatischen Vergleich von RNA-Expressionsprofilen aus EST-Datenbanken („electronic Northern“) wurden putative Tumorsuppressorgene (TSG) bzw. Onkogene identifiziert, die in gynäkologischen Tumoren eine differenzielle Expression zeigten. Die im Rahmen der „in silico“-Analyse aufgezeigte reduzierte Expression im Tumorgewebe im Vergleich zum korrespondierendem Normalgewebe konnte für die drei Tumorsuppressor-Kandidatengene Ras associated protein (Rab5C), alpha-Crystallin B (CRYAB) und Insulin-like growth factor-binding protein-4 (IGFBP-4) experimentell über RNA-Hybridisierung mittels „Cancer Profiling Arrays“ (CPA) und über quantitative RT-PCR bestätigt werden. Für eine weitere molekularbiologische und funktionelle Charakterisierung wurde das potentielle TSG IGFBP-4 ausgewählt. Die Analysen zum Verlust der Heterozygotie (LOH) in der chromosomalen Region 17q12-q21 des IGFBP-4-Gens mit Mikrosatelliten-Markern zeigten einen häufigen Allelverlust in sporadischen Ovarialkarzinomen (OvCa) auf, jedoch konnten keine inaktivierenden Strukturgenmutationen des IGFBP-4-Gens in diesen Tumoren identifiziert werden. Über ein neu entwickeltes DHPLC-Screening-Verfahren auf Basis von Bisulfit-modifizierter DNA wurde in OvCa und OvCa-Zelllinien mit reduzierter IGFBP-4-Expression eine CpG-Methylierung innerhalb des IGFBP-4-Promotors identifiziert und die epigenetische Inaktivierung von IGFBP-4 in diesen Tumoren funktionell nachgewiesen . Die Überexpression des IGFBP-4-Proteins in der OvCa-Zelllinie HEY führte zur Anreicherung des Proteins im Zellkulturüberstand und zur einer Hemmung der Zellproliferation – vermutlich bedingt durch eine vollständige Sequestrierung der IGF-I Wachstumsfaktoren. Anhand von Kristallviolettassays und FACS-Analysen konnte die Beteiligung des IGFBP-4-Proteins an pro-apoptotischen Prozessen gezeigt werden. HEY-IGFBP-4-Transfektanten reagierten deutlich sensitiver auf den Topoisomerase-II-Inhibitor Etoposid als die Kontrollzellen. Weitere Untersuchungen zeigten, dass dieser Einfluss auf die Apoptose zum einem durch eine Blockierung des IGF-I-induzierten „Survival“-Signalweges über die PI3K und Akt Proteinkinasen erklärt werden kann, zum anderen aber auch IGF-I/IGF-IR unabhängige Mechanismen involviert. Putative tumor suppressor genes (TSG) and oncogenes were identified as differentially expressed in gynaecological tumors by a bioinformatic comparison of RNA-expression profiles from EST-databases. The reduced expression in tumor tissue compared to the corresponding normal tissue revealed by the “in silico” analysis for the three putative tumor supressor cadidate genes Ras associated protein (Rab5C), alpha-Crystallin B (CRYAB) und Insulin-like growth factor-binding protein-4 (IGFBP-4) could be confirmed experimentally by RNA-hybridisation in „Cancer Profiling Arrays“ (CPA) und by quantitative RT-PCR. The putative tumor suppressor gene IGFBP-4 was selected for further molecular and functional characterisation. Loss of heterozygosity (LOH) analysis of the IGFBP-4-chromosomal region 17q12-q21 with microsatellite markers showed a frequent allel loss in sporadic ovarian cancers (OvCa), but no functional mutations of the IGFBP-4 gene could be found in these tumors. Through a new developed DHPLC-screening-method based on bisulfit-modified DNA a CpG-methylation within the IGFBP-4-promotor was identified in ovarian cancers and ovarian cancer-cell lines and the functionality of the epigenetic inactivation of IGFBP-4 in these tumors could be shown. The strong overexpression of the IGFBP-4 protein in the ovarian cancer cell line HEY led to a strong accumulation of the protein in the cell culture supernantant and significantly reduced cell proliferation – propably due to a total sequestration of the IGF-I growth factors. Crystalviolet-assays and FACS-analysis revealed a contribution of the IGFBP-4-protein to pro-apoptotic processes. HEY-transfectants responded quite more sensitive to the topoisomerase-II-inhibitor etoposide than control cells. Further investigations revealed that this pro-apoptotic IGFBP-4-effect could be explained on the one side by the blockage of the IGF-I-induced “survival” pathway. On the other side this IGFBP-4-specific impact on apoptosis involves also obviously IGF–independent mechanisms.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	06.02.2006
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	03.02.2006
Datum der Promotion:	03.02.2006