Dokument: B4: Ein neues Antigen von Toxoplasma gondii mit "coiled-coil"-Struktur:
Molekularbiologische und funktionelle Charakteresierung.

Titel:	B4: Ein neues Antigen von Toxoplasma gondii mit "coiled-coil"-Struktur: Molekularbiologische und funktionelle Charakteresierung.
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3276
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20051222-001276-7
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Ailyati, Aziz [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 3,06 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragender:	Prof. Dr. Däubener, Walter [Gutachter]
Stichwörter:	Toxoplasma gondii
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:	T. gondii ist ein obligat intrazellulär lebendes, parasitäres Protozoon mit großer medizinischer Bedeutung. Das Ziel dieser Arbeit war, das aus T. gondii neu isolierte B4-Protein biochemisch und funktionell zu charakterisieren. Das B4-Gen wurde erstmals bei der Analyse einer cDNA-Expressionsbank von T. gondii mit Seren von Toxoplasma-infizierten Patienten gefunden. Die durchgeführten quantitativen RT-PCR- und Northern-Blot-Analysen zeigten, dass das B4-Transkript nur in geringen Mengen in T. gondii vorkommt. Untersuchungen der genomischen B4-Sequenz ergaben, dass es sich um ein „single copy“ Gen handelt. Das B4-Gen ist auf dem Chromosom X lokalisiert und kodiert für ein 27 kDa Protein welches keine signifikanten Homologien zu bekannten Proteinen aufweist. Die Sekundärstrukturanalysen sagen ein α-helikakes, hydrophiles Protein mit großer Neigung zur Ausbildung von „coiled-coil“-Strukturen voraus. Diese „coiled-coil“-Struktur ist bis jetzt nur bei vier zytoskelettalen Proteinen von T. gondii ausgeprägt, deren Genen sich ebenfalls auf Chromosom X befinden. Das Antigen B4 zeichnet sich durch eine hohe Reaktivität mit ca. 30% der Seren von chronischen und akut infizierten Patienten aus. Mit Hilfe eines Antiserums, das gegen ein Peptid aus der B4-„coiled-coil“-Sequenz generiert wurde, konnte das B4-Antigen in Toxoplasmen in Western-Blots und mittels Immunfluoreszenz nachgewiesen werden. Das B4-Protein wurde im Zytoplasma von Tachyzoiten und auch in Bradyzoiten nachgewiesen. Bei Zellfraktionierungsexperimenten konnte gezeigt werden, dass das B4-Protein sowohl löslich im Zytosol als auch membrangebunden vorkommt. In humanen Tumorzellen konnte die Expression des T. gondii B4-Gens erfolgreich durchgeführt werden. Dabei erscheint das Fusionsprotein B4-GFP in Immunfluoreszenzanalysen als Punktmuster im Zytosol verteilt und ähnelt damit dem Aktin-Stress-Fiber-Phänotyp, der auch bei der Expression von Toxofillin in HeLa Zellen beobachtet wurde. Um die Funktion des B4-Proteins weiter zu analysieren wurden B4-„knock-out“-Mutanten hergestellt und charakterisiert. Diese Mutation erwies sich als letal. Bei der Analyse von B4-Fusionsprotein-produzierenden Mutanten fällt, unabhängig von der Art des Fusionspartners (Myc, GFP, YFP), sowohl die Reduktion des Parasitenwachstums als auch die Entstehung von Residualkörpern bei der intrazellulären Vermehrung auf. Die entstandenen Residualkörper ähneln phänotypisch denen, die bei der Überexpression von Myosin B/C bei T. gondii beschrieben sind. Ferner reduziert die Überexpression des B4-Proteins in T. gondii auch die Bewegungsfähigkeit des Parasiten, nicht aber dessen Invasionsfähigkeit. Die vorliegenden Daten lassen vermuten, dass es sich bei B4 um ein cytoplasmatisches Protein handelt, welches vermutlich eine Funktion bei der Cytokinese und der Replikation von Toxoplasma gondii hat.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	22.12.2005
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	12.12.2005
Datum der Promotion:	12.12.2005