Dokument: Aufreinigungsverfahren für den Membranarm von Komplex I aus Neurospora
| Titel: | Aufreinigungsverfahren für den Membranarm von Komplex I aus Neurospora | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3266 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20051215-001266-1 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Karschnia, Sven [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Weiss, Hanns [Gutachter] Prof. Dr. Schmitt, Lutz [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Komplex I, Membranarm, Oxidative Phosphorylierung, Proteinaufreinigung, Hydroxylapatit | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 540 Chemie | |||||||
| Beschreibung: | Die NADH:Ubichinon Oxidoreduktase, der Komplex I der mitochondrialen Atmungskette, koppelt den Elektronentransfer von NADH auf Ubichinon mit der Translokation von vier Protonen über die innere Mitochondrienmembran. Somit trägt er wesentlich zum Aufbau des elektrochemischen Membranpotentials bei, das zur Synthese von ATP oder für aktive Transportprozesse über die Membran genutzt wird. Der Komplex I besitzt ein Molekulargewicht von ca. 1 MDa und besteht aus bis zu 44 Untereinheiten. Er kann unterteilt werden in einen peripheren und einen membranintegralen Arm. Alle bisher bekannten Redoxgruppen befinden sich im peripheren Arm. Somit sind sowohl der Elektronentransport durch den membran-integralen Teil sowie der Mechanismus der Protonentranslokation unverstanden. Die Kristallisation als Vorraussetzung für eine Röntgenstrukturanalyse des Komplex I ist aufgrund der gegenseitigen Beweglichkeit von peripherem Arm und Membranarm wenig erfolgsversprechend. Aus diesem Grund wird in diesem Institut der Komplex I aus dem Hyphenpilz Neurospora crassa durch das chaotrope Salz Kaliumrhodanid zerlegt und durch Zuckergradientenzentrifugation und Größenausschlußchromatographie der Membranarm aufgereinigt. Jedoch konnte der so gewonnene Membranarm bisher nicht reproduzierbar kristallisiert werden. In dieser Arbeit wurde nach einer alternativen Aufreinigungsmethode für den Membranarm des Komplex I aus N. crassa gesucht. Durch Einführung eines Hydroxylapatit-Batch-Verfahrens wurde aus einer Mitochondriensuspension eine Proteinlösung hergestellt, aus der über Ionenaustausch- und Größenausschlußchromatographische Schritte der Membranarm in guter Ausbeute und Reinheit isoliert wurde. Auch wurde versucht, die Aufreinigung zu verkürzen, indem der Membranarm ohne vorherige Isolierung des Gesamtkomplexes direkt aus Mitochondrien gewonnen wurde. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Chemie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 15.12.2005 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 02.12.2005 | |||||||
| Datum der Promotion: | 02.12.2005 |
