Dokument: Quantitative „real-time“ PCR bei Patienten
mit follikulärem Lymphom und
kombinierter Chemo-Immuntherapie mit Rituximab

Titel:	Quantitative „real-time“ PCR bei Patienten mit follikulärem Lymphom und kombinierter Chemo-Immuntherapie mit Rituximab
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=3254
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20051205-001254-0
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Fischer, Christian Alexander [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 871,8 KB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	PD Dr. Kronenwett, Ralf [Gutachter] PD Dr. Warskulat, U. [Gutachter] Prof. Novotny, G. E. K. PhD. [Gutachter]
Stichwörter:	lightcycler, pcr, lymphom, rituximab, fret, molekulargenetik, chemotherapie, t(14;18), translokation, bcl2lightcycler, chemotherapy, translocation, lymphoma, real-time, antibody, remission, purging, fret, immunoglobulin
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die für das follikuläre Lymphom charakteristische Translokation t(14;18) verlagert das Onkogen bcl-2 auf Chromosom 18 in den Schwerketten-Immunglobulin-Genlokus auf Chromosom 14. Daraus resultiert eine bcl-2-Überexpression mit Hemmung der Apoptose während der B-Zell-Entwicklung. Im Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass die quantitative „real-time“ PCR (RQ-PCR) mit Hilfe der LightCycler®-Technologie genaue und reproduzierbare Messungen der t(14;18)-positiven Zellen im Knochenmark (KM) und im peripheren Blut (PB) möglich macht. Dabei wurde die t(14;18)-spezifische MBR („major breakpoint region“)-DNA amplifiziert und die Menge der Translokation-positiven Zellen quantifiziert. Die Methode konnte eine Tumorzelle in 105 normalen mononukleären Zellen nachweisen. Wir prüften den Zusammenhang zwischen molekularbiologisch nachweisbaren t(14;18)-positiven Zellen mit klinischen Parametern wie Knochenmarkinfiltration oder Remissionsstatus und der Behandlung von Patienten mit follikulärem Lymphom. Hierfür wurden 52 Patienten innerhalb von dreieinhalb Jahren zu verschiedenen Zeitpunkten KM- und PB-Proben entnommen und daraus gewonnene DNA im LightCycler® auf die Translokation untersucht. Der Vergleich zwischen KM und PB zeigte ähnliche Werte t(14;18)-positiver Zellen, so dass zukünftig PB-Proben für das molekulare Monitoring ausreichen. Die Menge der t(14;18)-positiven Zellen korrelierte signifikant mit der Krankheitsphase, da wir im Gegensatz zu Patienten mit Erstdiagnose in Patienten mit Rezidiv zehnmal höhere Mengen an t(14;18)-positiven Zellen nachweisen konnten. Bei Erstdiagnose-Patienten im Stadium IV erhielten wir höhere Werte als bei solchen in den Stadien II und III. Proben aus histopathologisch infiltriertem Knochenmark enthielten mehr t(14;18)-positive Zellen als solche aus morphologisch unauffälligem Mark. Darüber hinaus gestattete die quantitative PCR die serielle molekulare Untersuchung einer „minimal residual disease“ (MRD) in Patienten, die eine konventionelle oder dosiserhöhte zytotoxische Chemotherapie in Kombination mit dem monoklonalen Anti-CD20-Antikörper Rituximab (R) erhielten. Im Rahmen dieser Studie wurde erstmals die Wirksamkeit des Antikörpers in Kombination mit Chemotherapie als Erstlinientherapie bei Patienten mit follikulärem Lymphom auf molekularer Ebene untersucht. Im Hinblick auf das „in vivo-Purging“-Potential verschiedener Chemotherapeutika erwies sich die Kombination R/CHOP wirkungsvoller als die Kombination R/FM. Nach Hochdosistherapie mit R/BEAM sanken die t(14;18)-Werte sogar unter die Nachweisgrenze. Diese Arbeit zeigt, dass die RQ-PCR mit dem LightCycler® eine zuverlässige und sensitive Methode zur Quantifizierung t(14;18)-positiver Zellen im KM und PB von Patienten mit follikulärem Lymphom darstellt. Sie erlaubt die Untersuchung des therapeutischen Ansprechens sowie die Evaluation neuer Therapiekonzepte auf molekularer Ebene. Objectives: Quantitative real-time PCR (qPCR) is a suitable method to measure residual disease in hematological malignancies. Our objective was to assess a LightCycler®-based qPCR for t(14;18)(q32;q21)(IgH/bcl-2)-positive cells quantification in the context of clinical and morphopathological characteristics of patients with follicular lymphoma treated with Rituximab (R) in combination with conventional or high-dose chemotherapy. Methods: 270 bone marrow (BM) and peripheral blood (PB) samples collected from 52 patients with follicular lymphoma at diagnosis or at relapse before or sequentially during therapy were examined by qPCR and nested-PCR. Results: A greater amount of t(14;18) positive cells was observed in BM in comparison with PB in 76% of paired samples. Presence and number of t(14;18)-positive cells in BM and PB correlated with lymphoma activity. Significantly higher numbers of lymphoma cells were found in non-remission patients compared to patients in clinical remission. While non-remission, ten-fold higher numbers were measured at relapse than at diagnosis. During remission, significantly higher levels were found in partial compared to complete remission. During first-line therapy, R/CHOP had higher in vivo purging ability than R/FM. After R/HAM or R/BEAM, the level of t(14;18)-positive cells dropped under the detection limit in 80% of patients. Conclusions: LightCycler® qPCR is a reliable method for quantitative molecular monitoring of t(14;18) positive cells in BM and PB of patients with follicular lymphoma. It reflects clinical characteristics of patients and allows assessment of response to different treatment regimens on a molecular level.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	05.12.2005
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	05.12.2005
Datum der Promotion:	05.12.2005