Dokument: Neue Methoden zur Untersuchung von Expression und Aktivität der NO-Synthase in menschlichen Erythrozyten

Titel:	Neue Methoden zur Untersuchung von Expression und Aktivität der NO-Synthase in menschlichen Erythrozyten
Weiterer Titel:	New experimental methods for the study of NO synthase expression and activity in human erythrocytes
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=29770
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20140624-103949-3
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Römer, Tristan [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,23 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 17.06.2014 / geändert 17.06.2014
Beitragende:	Prof. Dr. Kelm, Malte [Gutachter] Prof. Dr. Suschek, Christoph V. [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Es ist bekannt, dass Erythrozyten eine funktionelle NO-Synthase exprimieren, die weitestgehend der endothelialen NO-Synthase (eNOS) entspricht. Ein solches Enzym konnte jedoch bis dato noch nicht direkt nachgewiesen werden, und daher sind auch die (patho-)physiologische Bedeutung des in den Erythrozyten produzierten NO und seine klinische Relevanz bislang nicht ausreichend geklärt. Der experimentelle Zugang zur erythrozytären NOS-Aktivität wird dabei durch den Mangel an spezifischen Methoden erschwert. In dieser Doktorarbeit konnte durch eine neue Strategie eine endotheliale NO-Synthase aus menschlichen Erythrozyten isoliert werden. Das Prinzip dieser Methode ist, dass die Erythrozyten zunächst lysiert werden und das erythrozytäre NOS-Protein dann über eine spezielle Immunpräzipitationsmethode aus diesem Lysat isoliert und dann mittels Gelelektrophorese aufgetrennt wird. Durch anschließende Visualisierung mittels Coomassie-Blau-Färbung und Überprüfung der Spezifität mit dem Verfahren der Western-Blot-Analyse konnte der Beweis für die Existenz einer eNOS in menschlichen Erythrozyten erbracht werden. Des Weiteren wurde in dieser Arbeit eine neue Methode zur Messung der intrazellulären NO-Produktion in Erythrozyten etabliert und damit die Aktivität einer erythrozytären NO-Synthase nachgewiesen. Hierzu wurde die Sensitivität des zellpermeablen Fluoreszenzfarbstoffes 4-Amino-5-methylamino-2,7-difluorofluorescein Diacetat (DAF-FM-Diacetat) mit dem Verfahren der Durchflusszytometrie kombiniert, indem Erythrozyten gesunder Probanden mit DAF-FM-Diacetat behandelt wurden und anschließend die Fluoreszenz der Erythrozytenpopulation in einem Durchflusszytometer (BD FACS Canto II) gemessen und aufgenommen wurde. Dieses mittels Durchflusszytometrie gemessene intrazelluläre Fluoreszenzsignal wurde mit dem in einem Fluorometer gemessenen Gesamtfluoreszenzsignal verglichen. Die Etablierung dieses Verfahrens könnte durch Anwendung in in-vivo- und klinischen Studien dazu beitragen, dass schließlich auch die klinische Bedeutung des NOS-abhängigen NO in Erythrozyten entschlüsselt wird. Durch den Nachweis der Expression einer aktiven eNOS in Erythrozyten wird das Verständnis von der Pathophysiologie der ,,endothelialen Dysfunktion’’ um einen entscheidenden Aspekt erweitert, durch den sich zukünftig ein völlig neuer Ansatzpunkt für die Entwicklung neuer diagnostischer und therapeutischer Strategien zur Bekämpfung kardiovaskulärer Erkrankungen ergeben könnte.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	24.06.2014
Dateien geändert am:	24.06.2014
Promotionsantrag am:	23.09.2013
Datum der Promotion:	19.05.2014