Dokument: Interferenz des Hepatitis C Virus mit der EGF Rezeptor Familie unter besonderer Berücksichtigung der Neuregulin 1-vermittelten Herabregulation des ErbB3 Rezeptors

Titel:	Interferenz des Hepatitis C Virus mit der EGF Rezeptor Familie unter besonderer Berücksichtigung der Neuregulin 1-vermittelten Herabregulation des ErbB3 Rezeptors
Weiterer Titel:	Interference of the Hepatitis C Virus with the EGF receptor family with particular regard to Neuregulin 1-mediated downregulation of the ErbB3 receptor
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=29713
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20140606-110850-3
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Dr. rer. nat. Eisenbürger, Sabine [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 6,95 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 06.06.2014 / geändert 06.06.2014
Beitragende:	Prof. Dr. Bode, Johannes [Gutachter] Prof. Dr. Willbold, Dieter [Gutachter]
Stichwörter:	HCV, ErbB
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	Ein Schwerpunkt der hier vorgelegten Arbeit ist die Interferenz des Hepatitis C Virus mit der Expression des zur EGF Rezeptor Familie gehörenden ErbB3 Rezeptors. Die erhobenen Daten belegen, dass die Herabregulation des Rezeptors in Gegenwart des HCV Replikons bereits auf Transkriptebene erfolgt und durch die verstärkte Expression seines Liganden NRG1 bedingt ist. Der supprimierende Effekt von NRG1 auf die Expression von ErbB3 konnte durch cAMP-Akkumulation in der Zielzelle simuliert werden. Weiterführende Untersuchungen zur Regulation der NRG1 Expression durch HCV legen nahe, dass HCV die Expression von NRG1 Sp1-abhängig reguliert. Inhibitor Experimente lassen ferner vermuten, dass die HCV-induzierte verstärkte Aktivierung der p38MAPK in diesem Zusammenhang von Bedeutung ist. Die vorliegenden Untersuchungen legen weiterhin nahe, dass die NRG1-vermittelte Herabregulation von ErbB3 durch HCV die Oberflächenexpression der anderen ErbB Rezeptorfamilienmitglieder dahingehend verändert, dass sowohl der EGF Rezeptor (EGFR) als auch ErbB2 verstärkt auf der Oberfläche präsentiert werden. Hiermit übereinstimmend führt der Knockdown von ErbB3 durch spezifische siRNA zu einer verstärkten Oberflächenexpression des EGF Rezeptors. Diese Beobachtung ist interessant, da Arbeiten anderer Gruppen kürzlich belegen konnten, dass EGFR für den Eintritt von HCV in die Wirtszelle von Bedeutung ist. Es wäre somit denkbar, dass HCV über einen NRG1-vermittelten parakrinen Mechanismus die Rezeptorkonstellation auf der Oberfläche benachbarter Zellen dahingehend verändert, dass ein Viruseintritt begünstigt wird. Diese Überlegungen werden durch eigene Befunde unterstützt. Die Vorbehandlung von Huh7.5 Zellen mit der NRG1 Isoform HRG1β führt zu einer verstärkten viralen Replikation nach Infektion mit dem HCV Stamm JC1. In einem zweiten, eher methodisch orientierten Teil der Arbeit wurde die Interaktion der NS5B Polymerase aus HCV mit der wirtsspezifischen Tyrosinkinase c-Src weitergehend untersucht. In Vorarbeiten der Arbeitsgruppe war eine Interaktion von c-Src mit dem vollständigen NS5B-Protein bereits beschrieben worden. Da das vollständige NS5B-Protein am C-Terminus einen Membrananker enthält, sollte hier zunächst ein Präzipitations- oder Aggregationsartefakt des hydrophoben Volllängen-NS5B mit der verwendeten Sepharose bzw. c-Src ausgeschlossen werden. Hierzu wurden trunkierte NS5B Konstrukte ohne Membrananker generiert. Die Ergebnisse der Pulldown-Experimente mit diesen Konstrukten legen übereinstimmend mit den Ergebnissen der vorangehenden Untersuchungen nahe, dass es zu einer Interaktion von c-Src mit NS5B kommt. Weiterführende Untersuchungen lassen hier jedoch annehmen, dass anders als bisher angenommen die in der NS5B Sequenz enthaltenen PxxP-Motive als alleinige Interaktionspartner der c-Src-SH3 Domäne eher nicht in Frage kommen. The work presented in this thesis focuses on the interference of the Hepatitis C Virus with the expression of the ErbB3 receptor. In summary, data obtained using cells containing a HCV replicon demonstrates that downregulation of ErbB3 which belongs to the EGF receptor family already occurs at the transcript level and is caused by enhanced expression of the ErbB3 ligand NRG1. This suppressive NRG1 effect could be simulated by intracellular cAMP accumulation in the target cells. Further experiments showed that the ligand NRG1 is expressed in a Sp1-dependent manner. Additionally, inhibition studies suggested that this involves a HCV-induced p38MAPK hyperactivation. The findings also implicate that NRG1-mediated ErbB3 downregulation by HCV ultimately influences ErbB receptor family surface expression to the point where both EGF receptor (EGFR) and ErbB2 are increasingly presented at the cell surface. This is supported by experiments in which EGFR surface expression was increased by siRNA-mediated knockdown of ErbB3. Moreover, it was recently shown by several groups that EGFR plays a role in host cell entry of HCV. It is thus very conceivable that HCV modifies ErbB receptor composition on the surface of neighboring cells via a NRG1-mediated paracrine mechanism, making them more permissive for viral entry and thus spreading infection. This concept is supported by the observation that pretreatment of Huh7.5 cells with the NRG1 isoform HRG1β leads to increased viral replication upon infection with the HCV strain JC1. In a secondary project, the mode of interaction of the viral NS5B polymerase with the host specific tyrosine kinase c-Src was investigated in detail. Previously, this lab had demonstrated interaction between c-Src and the full-length NS5B protein containing a membrane anchor at its C-terminus that crosses the lipid bilayer as a transmembrane segment. Since this anchor impairs solubility of NS5B, a false-positive interaction artifact caused by NS5B precipitation onto the sepharose surface or unspecific aggregation with the c-Src bait needed to be excluded. Pulldown experiments with truncated NS5B constructs lacking the membrane anchor confirmed the previous findings supporting a physiological interaction of full-length NS5B with c-Src. Further experiments, however, suggest that the PxxP motifs found within the NS5B sequence are not likely to be the exclusive sites of interaction with the SH3 domain of c-Src.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät
Dokument erstellt am:	06.06.2014
Dateien geändert am:	06.06.2014
Promotionsantrag am:	14.04.0014
Datum der Promotion:	20.05.2014