Dokument: Charakterisierung der ubiquitären mitochondrialen Sulfhydryloxidase (SOx) Erv1p / Alrp aus Hefe und Säugern.

Titel:	Charakterisierung der ubiquitären mitochondrialen Sulfhydryloxidase (SOx) Erv1p / Alrp aus Hefe und Säugern.
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2968
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20041118-000968-7
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Rosenberg, Beate R. [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 7,71 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Martin, William [Gutachter] Prof. Dr. Lisowsky, Thomas [Gutachter]
Stichwörter:	Sulfhydryloxidasen, Oxidase, Erv1p, 3D-Modell, Leber, Hefe, Säugetiere, Zellkulturen, mitochondrial, CXXC-MotivYeast, sulfhydryl oxidase, interact, redox-active CXXC,mitochondrial Erv1p, dimer formation, cysteine mutants
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:	In der vorliegenden Arbeit geht es um die ubiquitäre FAD-abhängige Sulfhydryloxidase Erv1p von Hefe und höheren Eukaryoten. Das Enzym ist bevorzugt im Intermembranraum der Mitochondrien lokalisiert und katalysiert unabhängig vom Endoplasmatischen Retikulum, das Einfügen von Disulfidbrücken in Substrate. Voraussetzungen für die Untersuchungen an Hefe Erv1p waren sechs Cystein-Mutanten und ein etabliertes biochemisches Testsystem. Damit gelang es, ein dynamisches 3D-Modell für den Enzymmechanismus zu entwickeln. Das 3D-Modell entstand aus den Kenntnissen über den charakteristischen Domänenaufbau von Erv1p und den gefundenen Interaktionen seiner funktionellen Cysteine. Als Grundlage für das Modell diente eine Röntgenkristallstruktur Analyse des nahe verwandten Hefeenzyms Erv2p. Die Funktionen der sechs Cysteine des Erv1p wurden näher untersucht. Die C-terminalen Cysteinpaare sind strukturell wichtig für die FAD-Bindungstasche. Die N-terminalen Cysteine sind verantwortlich für die Dimerbildung und den Transfer der Disulfidbrücken vom aktiven Zentrum auf Substrate. Dabei ist der flexible N-terminale Arm des Enzyms in der Lage eine Bewegung auszuführen. Erv1p bildet Homodimere in einer antiparallelen Anordnung aus. Eine Cystein-Mutante von Erv1p wurde für die Substratsuche genutzt. Das Substratfangmodell gab dabei erste Hinweise auf ein mögliches Substrat von 2 kDa Größe. Bei der in vivo Substratsuche konnte mit bekannten Intermembranraum-Antikörpern ein mögliches Substrat identifiziert worden. Die Arbeiten an dem Homologen humanen Erv1p, dem Alrp der Säuger, konnten das scErv1-Modell erfolgreich für höhere Eukaryoten erweitern. Neue Ergebnisse liegen vor. Alle Daten aus den in vitro- und in vivo-Untersuchungen ergaben ein einheitliches Bild. Die Expressions- und Regulationsmechanismen sind für Alrp komplexer. Es gibt drei Alrp-Varianten in Säugetierzellen. Ihre subzellularen Lokalisationen wurden identifiziert. Alrp konnte als ein essentielles und ubiquitäres Protein in allen Geweben von Säugern beschrieben werden. Alrp ist nicht leberspezifisch. In Zellkulturen wurde unter den speziellen Versuchsbedingungen alle Alrp-Varianten identifiziert. Es wird aktiv exkretiert. Eine eindeutige Lokalisation der Varianten in Zellkulturen war nicht möglich. Für die Expression der Varianten deuten die Untersuchungen auf differentielle Translation oder Protein-Prozessing hin. Die in vivo-Formen des Alrp wurden bei Maus, Ratte und Mensch untersucht. Alrp ist in den Mitochondrien mit der 23 kDa und 21 kDa Variante lokalisiert. Die 21 kDa Variante wurde extrazellular im Serum von regenerierenden Rattenlebern nachgewiesen. Die 15 kDa Variante von Alrp wurde bei meinen Gewebeuntersuchungen nie gefunden. Erst bei unspezifischen Gewebeabbau wurde ein Nachweis geführt.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	18.11.2004
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	12.11.2004
Datum der Promotion:	12.11.2004