Dokument: Etablierung einer sensitiven Nitratanalyse zur vollständigen Charakterisierung des L-Arginin-NO-Stoffwechsels in vitro und in vivo

Titel:	Etablierung einer sensitiven Nitratanalyse zur vollständigen Charakterisierung des L-Arginin-NO-Stoffwechsels in vitro und in vivo
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2966
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20041112-000966-7
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Gharini, Putrika [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 585,5 KB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Kelm, Malte [Gutachter] Prof. Dr. Suschek, Christoph V. [Gutachter]
Stichwörter:	Nitrat, Stickstoffmonoxid, Methode, Griess, Fluss-Injektions-Analyse
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Stickstoffmonoxid (NO) spielt eine große Rolle bei physiologischen Regulationsmechanismen im Herz-Kreislaufsystem, im zentralen und peripheren Nervensystem und im Immunsystem. Nach der Synthese von NO kann NO rasch oxidativ zu Nitrit und Nitrat verstoffwechselt werden. Das intravaskuläre NO wird zum größten Teil über seine Reaktion mit Hämoglobin zu Nitrat inaktiviert. Aufgrund des hohen basalen Nitratspiegels können geringere Veränderungen der NOS-Aktivität nur schwer als Veränderung der Nitratkonzentration detektiert werden. Nitrat spiegelt somit nicht sensitiv die Änderungen von NO-Bildung wieder. Die Bestimmung der Differenz scheiterte an der unzureichenden minimalen Auflösung bzw. an hohem Zeit- und Kostenaufwand der zur Verfügung stehenden Analysemethoden. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung von geeigneten Analyseverfahren zur Bestimmung des oxidativen Stoffwechselproduktes Nitrat in biologischen Matrizes zur vollständigen Charakterisierung des L-Arginin-NO-Stoffwechsels. Folgende Vorgehensweise wurde gewählt: 1. Die Etablierung valider, sensitiver, einfacher und kostengünstiger analytischer Verfahren, 2. die Entwicklung einer geeigneten Probenbehandlung, inklusive Lagerung, zur Optimierung der Analyse und der Einbindung in die Routinediagnostik, und 3. die biochemische Phänotypisierung von Nitrat in Abhängigkeit des NO-Metabolismus. Die vorliegenden Ergebnisse lassen sich wie folgt zusammenfassen: 1. Die Analyseverfahren, NR-FIA und VCl-FIA, erlauben erstmals die gleichzeitig sensitive und automatisierte Bestimmung von Nitrat in biologischen Matrizes. Somit ist es möglich, zahlreiche Proben im Rahmen von z.B. klinischen Studien zu messen. 2. Eine geeignete Probenaufarbeitung zur simultanen Bestimmung unterschiedlicher NO-Addukte aus nur einer Blutprobe wurde entwickelt. 3. Nach Ausschluss artifizieller Abbaureaktionen der oxidativen NO-Metabolite, Nitrit und Nitrat, wurde die Lagerung der nitrit- und nitrathaltigen Proben ermöglicht. 4. Nitrat konnte über die neu etablierten Analyseverfahren bei Mäusen und Menschen in verschiedenen Matrizes bestimmt werden. 5. Es konnte nachgewiesen werden, dass die Nitratkonzentration in vivo bei der Überexprimierung der iNOS und während chronischer Inhibition der eNOS signifikant verändert war. Ein spezifischer Anstieg der Nitratkonzentration konnte erstmalig in vitro aufgrund akuter Veränderungen der eNOS-Aktivität nachgewiesen werden. Daraus ergibt sich die Schlußfolgerung, dass durch sensitive und valide Analyseverfahren von Nitrat die Charakterisierung des L-Arginin-NO-Stoffwechselweges in vivo und in vitro vervollständigt werden kann. Die Bestimmung von Nitrat könnte zur Diagnostik, als Marker der NO-Bildung, zur Prognostik, durch Abschätzung von Entzündungsprozessen, und für eine langfristige Therapiekontrolle herangezogen werden.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	12.11.2004
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	11.10.2004
Datum der Promotion:	11.10.2004