Dokument: Molekularbiologische und biochemische Analyse des plastidären Tetratricopeptid-Repeat-Proteins HCF107 aus Arabidopsis thaliana

Titel:	Molekularbiologische und biochemische Analyse des plastidären Tetratricopeptid-Repeat-Proteins HCF107 aus Arabidopsis thaliana
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2906
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20040726-000906-9
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Stein, Bernhard [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 5,00 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Westhoff, Peter [Gutachter] Prof. Dr. Wagner, Rolf [Gutachter]
Stichwörter:	Tetratricopeptid-Repeat, TPR-Protein, Proteinkomplex, Plastide, Photosystem II, psbB-Operon, RNA-Prozessierung/Stabilität, hcf-Mutante
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 580 Pflanzen (Botanik)
Beschreibung:	Die plastidäre Genexpression wird zu einem großen Teil durch posttranskriptionelle Prozesse reguliert. Zu diesen Prozessen zählen die Prozessierung der 5’- und 3’-untranslatierten Region (UTR) der mRNAs durch Exo- und Endonukleasen, die mRNA-Stabilisierung durch 5’- und 3’-UTR bindende Faktoren sowie die Translation der reifen Transkripte. An diesen Prozessen ist eine Vielzahl nukleär kodierter Faktoren beteiligt. Im Rahmen dieser Doktorarbeit wurde einer dieser nukleär kodierten Faktoren anhand der hcf-(high chlorophyll fluorescence)-Mutante hcf107 aus Arabidopsis thaliana (Meurer et al. 1996; Felder et al. 2001) weitergehend charakterisiert. Die Mutante hcf107 ist, wie aus den vorhergegangenen Untersuchung bereits bekannt war, spezifisch in der 5’-Prozessierung und/oder Stabilisierung der psbH-Transkripte des plastidären psbB-Operon betroffen. Des Weiteren findet keine PsbB-Synthese statt, ohne dass ein ersichtlicher Defekt auf RNA-Ebene vorliegt (Felder et al. 2001). Das in der Mutante hcf107 betroffene Gen wurde zuvor mittels markergestützter Kartierung identifiziert und kodiert ein TPR-(tetratricopeptide repeat)-Protein von 652 Aminosäuren Größe (Sane et al. 2004, Manuskript in Vorbereitung). Zur Überprüfung der Kartierungsergebnisse wurde die korrespondierende cDNA isoliert und ihre Identität mittels Northern-Analysen und durch die Komplementation homozygoter Mutanten erfolgreich bestätigt. Im Anschluss wurde die klonierte HCF107-cDNA zur Herstellung von Protein A- und Hämagglutininfusionskonstrukten verwendet und diese wiederum erfolgreich zur Komplementation homozygoter Mutanten eingesetzt. Unter Verwendung dieser Komplementanten (HCF107cPA, HCF107cHA) wurde der Faktor HCF107 weitergehend molekularbiologisch und biochemisch untersucht. Dabei konnten in Lokalisationsstudien gezeigt werden, dass die HCF107-Fusionsproteine in den Chloroplasten importiert werden und dort assoziiert mit der Thylakoid- und/oder der Chloroplastenmembran vorliegen. Bei der Auftrennung solubilisierter Chloroplasten aus HCF107cPA-Pflanzen im linearen Saccharosedichtegradienten zeigte ein Teil des HCF107-Protein A-Fusionsproteins eine Verschiebung in den höhermolekularen Bereich des Gradienten mit einer Größe von bis zu 800 kDa. Somit konnte zum ersten Mal der Nachweis erbracht werden, dass HCF107 Bestandteil eines höhermolekularen Komplexes ist. Zur Identifizierung möglicher Komplexkomponenten wurden IgG-Affinitätsaufreinigungsversuche durchgeführt. Dabei konnte das HCF107-Protein A-Fusionsprotein in analytischen Mengen aufgereinigt werden, ein Nachweis möglicher interagierender Proteinkomponenten blieb jedoch erfolglos. Weiterhin konnte eine erhöhte Anreicherung von psbH-Transkripten in den Eluaten von HCF107cPA-Pflanzen nachgewiesen werden. Dies deutet darauf hin, dass psbH-RNAs Bestandteil des HCF107-Komplexes sind bzw. mit ihm assoziiert vorliegen.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Sonstige Einrichtungen/Externe
Dokument erstellt am:	26.07.2004
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	14.07.2004
Datum der Promotion:	14.07.2004