Dokument: Expression und Translation des COX1b-Gens in humanen Zellen - kein Hinweis auf die Bildung eines COX1b-Proteins

Titel:	Expression und Translation des COX1b-Gens in humanen Zellen - kein Hinweis auf die Bildung eines COX1b-Proteins
Weiterer Titel:	Expression and translation of the COX-1b gene in human cells – no evidence of generation of COX-1b protein
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=27989
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20140106-110400-1
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Reinauer, Christina [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 3,44 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 28.12.2013 / geändert 28.12.2013
Beitragende:	Prof. Dr. Schrör, Karsten [Gutachter] Prof. Dr. Brenneisen, Peter [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Die Cyclooxygenase1b (COX1b), ein Spleißprodukt des COX1-Gens, zeichnet sich durch die Retention des ersten Introns aus. Die Entstehung eines funktionell aktiven COX1b-Proteins in verschiedenen Spezies hängt von der jeweiligen Länge des Intron1 ab. In humanen Zellen führt das retinierte 94 bp lange Intron1 zu einer Leserasterverschiebung. Aufgrund des entstehenden verfrühten Stoppcodons sollte ein verkürztes Proteinfragment (9 kDa) entstehen. Trotzdem wurde nur die Expression eines voll abgelesenen COX1b-Proteins (70 kDa) beschrieben. In der vorliegenden Arbeit wurde COX1b-mRNA in einem humanen Überexpressionssystem analysiert und potentielle Korrekturmechanismen des Leserahmens untersucht, die die Entstehung des ca. 70 kDa messenden Proteins aus COX1b-mRNA ermöglichen. Das von Qin et al. (2005) postulierte mRNA Editing konnte nicht nachgewiesen wer-den. Bei der Sequenzierung von 104 COX1b-cDNAs humaner Gewebeproben aus Leber, Niere und Magen war Intron1 immer exakt 94 bp lang und stimmte bis auf einzelne Ausnahmen mit der veröffentlichten Sequenz überein. Die notwendigen RNA-Strukturvoraussetzungen für einen ribosomalen frameshift zur Leserahmenkorrektur werden von der humanen COX1b erfüllt. Es konnte gezeigt werden, dass Intron1 noch nachträglich aus der COX1b-mRNA entfernt werden und so aus COX1b-mRNA COX1-mRNA entstehen kann. Bei Expression der COX1b parallel zur COX1 und zur leserasterkorrigierten COX1bΔG in humaner Zellkultur entstand in allen drei Fällen ein 70 kDa großes Protein. N-terminale Markierungen der Proteine konnten weder im Western Blot gefunden werden noch zur Aufreinigung des Proteins herangezogen werden. Weder in den Lysaten überexprimierender Zellen, noch in Gewebeproben kann im Western Blot mit einem gegen die Intron1 Sequenz gerichteten α-COX1b-AK eine korrespondierende Bande nachgewiesen werden, die der erwarteten Größe einer COX1b (ca. 72 kDa) entspricht. Auch massenspektrometrisch konnten zwar COX1-typische, aber keine für eine COX1b spezifischen Peptide aus dem N-terminalen Bereich des Proteins, z.B. Signalpeptid oder Intron1 detektiert werden. Die Daten sprechen für eine Abspaltung des N-terminalen Signalpeptids inklusive der Intron1-Sequenz. Dass ein COX1b-Protein als instabiles Zwischenprodukt entsteht, kann nicht ausgeschlossen werden, das Endprodukt in den untersuchten humanen Zellen und Ge-weben war immer ein matures COX1 Protein.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Pharmakologie und Klinische Pharmakologie
Dokument erstellt am:	06.01.2014
Dateien geändert am:	06.01.2014
Promotionsantrag am:	22.01.2013
Datum der Promotion:	29.11.2013