Dokument: Identifizierung neuer immediate-early 3 Proteine des Maus-Cytomegalovirus (MCMV) und ihre Charakterisierung als putative Interferon-Antagonisten
| Titel: | Identifizierung neuer immediate-early 3 Proteine des Maus-Cytomegalovirus (MCMV) und ihre Charakterisierung als putative Interferon-Antagonisten | |||||||
| Weiterer Titel: | Identification of new immediate early 3 proteins of mouse cytomegalovirus (MCMV) and their characterization as putative interferon antagonists | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=27097 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20160219-141007-3 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Rattay, Stephanie [Autor] | |||||||
| Dateien: |
| |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibungen: | Ziel dieser Arbeit war es, Interferon (IFN)-Inhibitoren des Maus-Cytomegalovirus (MCMV) zu identifizieren, da gezeigt wurde, dass MCMV mit der NF-kB- sowie der IRF-3-abhängigen Typ I IFN-Induktion interferiert. Befunde unserer Arbeitsgruppe belegten zudem, dass für die Inhibition der IRF-3 Signaltransduktion die Expression der MCMV immediate-early-Gene hinreichend ist. Da in Immunoblot Analysen von wt-, Δie1- und Δie2-Virus-infizierten Zellen eine vergleichbare IRF-3-Inhibition zu beobachten war, rückte das ie3-Genprodukt (pIE-611) in den Fokus der Untersuchungen. Im Rahmen der ie3-Funktionsanalysen wurden zwei weitere bisher unbekannte ie3-Isoformen identifiziert. Diese ie3-Transkriptvarianten werden durch alternative Spleißvorgänge generiert und kodieren für die neuen IE3-Proteinisoformen pIE-453 (453 aa; 60 kDa) und pIE-310 (310 aa; 35-40 kDa). Die IE-453- und IE-310-Proteine werden wie das kanonische IE-611-Protein unter selektiven immediate-early-Bedingungen exprimiert. Auf Basis dieser Befunde wurde eine ΔIE-611 MCMV-Mutante konstruiert, die kein pIE-611 exprimiert, aber noch intakte pIE-453- und pIE-310-kodierende Sequenzen enthält. Mittels dieser Mutante konnte im Gegensatz zu bisherigen Annahmen erstmals nachgewiesen werden, dass das kanonische ie3-Genprodukt (pIE-611) für die MCMV-Replikation nicht essentiell ist. Der Nachweis einer erhöhten ISRE-Promotor/Enhancer-Aktivität und einer gesteigerten IFN-b-Gen-Transkription in ΔIE-611-infizierten Zellen deutet auf eine Beteiligung des IE-611-Proteins bei der Inhibition der Typ I IFN-Induktion hin. Im Rahmen von Western-Blot Analysen wurden stark erhöhte pIE1 (pp89)- sowie leicht erhöhte pM112/M113 (pE1)-Mengen in ΔIE-611-Virus- im Vergleich zu wt-Virus- infizierten Zellen nachgewiesen. Die verstärkte Expression viraler Genprodukte in ΔIE-611-Virus-infizierten Zellen spricht für eine Promotor-Repressor-Funktion des IE-611-Proteins. Insgesamt konnten somit neue ie3-kodierte Transkript- und Proteinisoformen identifiziert und dem pIE-611 eine potenzielle Funktion als IFN-Antagonist und als Promotor-Repressor zugeordnet werden.Aim of this thesis was the identification of mouse cytomegalovirus (MCMV)-encoded interferon (IFN) inhibitors, since it has been shown that MCMV interferes with the NF-kB- and the IRF-3-mediated type I IFN induction.
Data of our group demonstrated, that the MCMV immediate-early genes are sufficient for the repression of IRF-3 signaling. Since immunoblot analysis of wt-, Δie1- and Δie2-virus-infected cells revealed a similar inhibition of IRF-3 activation, the subsequent studies focused on the ie3 gene. While analyzing the ie3 (IE-611) gene functions, two unknown ie3 isoforms could be identified. These ie3 transcript isoforms are generated by alternative splicing and encode the new IE3 protein isoforms pIE-453 (453 aa; 60 kDa) and pIE-310 (310 aa; 35-40 kDa). Like the canonical IE-611 protein, the IE-453 and IE-310 protein isoforms are expressed under selective immediate-early conditions. Based on these findings, a ΔIE-611 MCMV mutant with defective pIE-611 but intact pIE-453 and pIE-310 coding sequences was constructed. In contrast to current opinion, this mutation resulted in a replication-competent virus, demonstrating for the first time that the canonical ie3 gene product (pIE-611) is non-essential for MCMV replication. The detection of a pronounced ISRE-promoter/enhancer activity as well as an enhanced IFN-b gene transcription in ΔIE-611-infected cells points towards an inhibitory function of the IE-611 protein concerning the type I IFN induction. In the context of immunoblot analysis strongly pronounced pIE1 (pp89) and slightly enhanced pM112/M113 (pE1) expression was detected in ΔIE-611- compared to wt-virus-infected cells. The pronounced expression of viral gene products in ΔIE-611-infected cells indicates a promoter repressor function of pIE-611. Altogether, new ie3 encoded transcript and protein isoforms were identified and a putative function as an IFN antagonist and a promoter repressor could be assigned to pIE-611. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Virologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 19.02.2016 | |||||||
| Dateien geändert am: | 19.02.2016 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 25.04.2013 | |||||||
| Datum der Promotion: | 03.07.2013 |
