Dokument: Neospora caninum GRA9: molekularbiologische und funktionelle Charakterisierung
| Titel: | Neospora caninum GRA9: molekularbiologische und funktionelle Charakterisierung | |||||||
| Weiterer Titel: | Neospora caninum GRA9: molecular and functional characterization | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=26057 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20130619-103410-5 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Leineweber, Margret [Autor] | |||||||
| Dateien: |
| |||||||
| Beitragende: | Prof. Dr. Däubener, Walter [Gutachter] Prof. Dr. Ernst, Joachim F. [Gutachter] | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibungen: | In der vorliegenden Arbeit konnte das dichte Granula-Protein NcGRA9 des obligat intrazellu-lären Parasiten Neospora caninum (N. caninum) beschrieben werden. N. caninum ist phylo-genetisch sehr nah verwandt mit dem bekannten Parasiten Toxoplasma gondii (T. gondii), in dem ein homologes TgGRA9 existiert. Es konnte gezeigt werden, dass sowohl auf genomi-scher Ebene als auch auf Proteinebene Gemeinsamkeiten zwischen beiden Proteinen be-stehen. Die Aminosäuresequenzen von NcGRA9 und TgGRA9 zeigen eine Identität von 60 %. Antikörper gegen rekombinantes NcGRA9 reagieren auch mit TgGRA9. Aufgrund dieser Kreuzreaktivität ist NcGRA9 als Antigen für die serologische Diagnose einer Neosporose in Rindern ungeeignet.
NcGRA9 wurde auch im Bezug auf seine Lokalisation untersucht. In extrazellulären Ta-chyzoiten ist das Protein innerhalb der dichte Granula zu finden und nach Wirtszellinvasion wird es in die parasitophore Vakuole (PV) sekretiert. Diese Lokalisation ist typisch für dichte Granula-Proteine. Außerdem gehört NcGRA9 zur Gruppe der exkretierten/sekretierten Anti-gene von N. caninum. Des Weiteren wurde die Interaktion von NcGRA9 mit membranösen Strukturen innerhalb der PV analysiert. Nach der Sekretion liegt NcGRA9 sowohl löslich als auch membrangebunden vor. Weiterführende Analysen legten dar, dass NcGRA9 wahr-scheinlich über periphere Membranproteine mit dem membranösen intravakuolären Netz-werk assoziiert sein könnte. Ferner ist NcGRA9 an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt, dabei wurde NcMAG1 als möglicher Interaktionspartner identifiziert. Die Analyse von C-terminal trunkierten NcGRA9-Proteinen ergab, dass es im C-terminalen Bereich des Moleküls Regionen gibt, die für das Targeting- und Sekretionsverhalten von NcGRA9 entscheidend sind. Zusammenfassend weist das NcGRA9-Protein viele Ähnlichkeiten zu seinem homologen Protein in T. gondii auf. Jedoch gibt es im Detail Unterschiede im Bezug auf die Membran-bindung und das Interaktionsverhalten mit anderen Proteinen in der PV. Diese Abweichungen könnten zur unterschiedlichen Wirtsspezifität, Virulenz und Wachstumskinetik von T. gondii und N. caninum beitragen.In the present thesis the dense granule protein NcGRA9 of the obligate intracellular parasite Neospora caninum (N. caninum) is described. N. caninum is phylogenetically closely related to the known parasite Toxoplasma gondii (T. gondii) where a homologous TgGRA9 protein exists. Similarities between both proteins have been shown on genomic and on protein basis. Comparison of the amino acid sequences of NcGRA9 and TgGRA9 reveal a sequence iden-tity of about 60 %. Antibodies directed against recombinant NcGRA9 also recognise TgGRA9. Depending on this cross-reactivity NcGRA9 is not suitable for usage as an antigen in sero-logical diagnostic for Neosporosis in cattle. NcGRA9 was also analysed regarding its localisation. In extracellular tachyzoites the protein is detected inside the dense granules and after invasion of the host cell it is secreted into the parasitophorous vacuole (PV). This distribution is typical for dense granule proteins. In addi-tion, NcGRA9 belongs to the group of excreted/secreted antigens of N. caninum. Further-more, interaction of NcGRA9 with membranous structures inside the PV was analysed. Fol-lowing secretion NcGRA9 is soluble as well as membrane-bound. Additional analyses demonstrated that NcGRA9 is likely associated to the membranous intravacuolar network via peripheral membrane proteins. Moreover, NcGRA9 participates in protein-protein-interactions and NcMAG1 was identified as a putative interaction partner of NcGRA9. C-terminally truncated NcGRA9 proteins were analysed and it became obvious that the C-terminal region of the protein contains areas that could be crucial for targeting and secretion of NcGRA9. In summary, NcGRA9 exhibits many similarities to its homologue in T. gondii. However, there are differences regarding membrane binding capacity and the interaction with other proteins inside the PV. These aberrations could contribute to the different host specificity, virulence and growth kinetic of T. gondii and N. caninum. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Medizinische Mikrobiologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 19.06.2013 | |||||||
| Dateien geändert am: | 19.06.2013 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 16.01.2013 | |||||||
| Datum der Promotion: | 24.04.2013 |
