Dokument:
Neue tetracyclinregulierbare AAV-Einkassettenvektoren
für gentherapeutische Ansätze
| Titel: | Neue tetracyclinregulierbare AAV-Einkassettenvektoren für gentherapeutische Ansätze | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2581 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20030724-000581-5 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Bender, Hans-Ulrich [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | PD Dr. Hanemann, C.-O. [Gutachter] PD Dr. Rosenbaum, Thorsten [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Adeno-assoziiertes Virus, AAV, Tetracyclin, Tet-System, Regulation, Gentherapie, Schwann-Zellen, FACSadeno-associated virus, AAV, tetracycline, regulation, tet-system, gene therapy, Schwann cells, FACS | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit | |||||||
| Beschreibung: | In der vorliegenden Arbeit wurden insgesamt fünf verschiedene Gentherapievektorkonstrukte an Rattenschwannzellen und HeLa-Zellen in vitro getestet. Die Konstrukte stellen Einkassettenvektoren dar, die das Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) als Detektionsgen unter der Kontrolle des tetracyclinregulierbaren Tet-On- bzw. Tet-Off-Systems exprimieren. Es wurde jeweils ein Tet-On- und ein Tet-Off-Konstrukt mit nicht gewebespezifischem Promotor verwendet, ein Konstrukt enthielt ein bidirektionales tetracyclinresponsives Expressionssystem. Mit diesen Vektoren wurde die Regulierbarkeit des Systems geprüft. Außerdem wurde jeweils ein Tet-On- und ein Tet-Off-Konstrukt mit schwannzellspezifischem Myelinprotein P0-Promotor hergestellt, um eine Zellspezifität der Konstrukte zu erreichen. Alle Konstrukte basieren auf dem adeno-assoziierten Virus (AAV) als Vektor. Rattenschwannzellen und HeLa-Zellen wurden mit diesen Vektorkonstrukten transfiziert und mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung (FACS) bezüglich ihrer EGFPExpression sortiert und zu verschiedenen Zeitpunkten analysiert. Es konnte gezeigt werden, daß die Einkassetten-Vektorkonstrukte sowohl im Tet-On System als auch im Tet-Off System signifikant durch Tetracyclingabe reguliert werden können. Des weiteren konnte gezeigt werden, daß die konstruierten schwannzellspezifischen Konstrukte in Schwannzellen signifikant stärker exprimiert werden als in HeLa-Zellen. Dennoch konnten alle Konstrukte die selbst gesetzte Anforderung von mindestens zehnfacher Regulierbarkeit in einem kurzen Beobachtungszeitraum nicht erfüllen und zeigten durchweg eine Hintergrundaktivität des Systems in allen Konstrukten. In Langzeitexperimenten über einen Zeitraum von sechs Wochen wies nur das Konstrukt pAC1 (mit bidirektionalem Promotor) eine bis zu 100-fache Regulierbarkeit in Schwannzellen und eine Hintergrundaktivität von weniger als 1% auf. Die Ergebnisse zeigen, daß AAV-Einkassettenvektoren in Schwannzellen prinzipiell verwendbar sind, daß diese Einkassettenvektoren durch Tetracyclin signifikant regulierbar sind und daß Zellspezifität eines Gentherapievektors durch Einfügen zelltypenspezifischer Promotoren möglich ist. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät | |||||||
| Dokument erstellt am: | 24.07.2003 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 18.07.2003 | |||||||
| Datum der Promotion: | 18.07.2003 |
