Dokument:
Massenspektrometrische Analytik
komplexer Peptidgemische
| Titel: | Massenspektrometrische Analytik komplexer Peptidgemische | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2283 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20010215-000283-8 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Metzger, Sabine [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Spengler, Bernhard [Gutachter] Prof. Dr. Riesner, Detlev [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | MALDI, PSD-MALDI, Kapillar Elektrophorese, Sequenzierung, Phosphorylierung, PeptideMALDI,PSD-MALDI, Capillary Electrophoresis, Sequenzing, Phosphorylation,Peptides | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 540 Chemie | |||||||
| Beschreibungen: | In der vorliegenden Arbeit wurde eine universell anwendbare Gesamtmethodik zur Identifizierung und Sequenzierung von unbekannten Peptiden in komplexen Mischungen entwickelt. Diese Strategie berücksichtigt die Komplexität der Proben, indem verschiedene Trenntechniken wie die HPLC und CE kombiniert werden. Der zweidimensionalen Auftrennung schliesst sich eine automatisierte Fraktionierung und Präparation für die MALDI-MS Analyse mit dem entwickelten Präparationsroboter an. Eine der Hauptproblematiken in der Bioanalytik sind die sehr geringen Probenmengen. Durch die direkte Kopplung der CE, einer der empfindlichsten Trennmethoden in der Bioanalytik, mit der automatischen Probenpräparation können verlustbringende Probentransferschritte vermieden werden. Der entwickelte Präparationsroboter kann neben der automatisierten Probenpräparation für die MALDI-MS auch als "intelligente Pipette" für Probenmengen im Nanoliterbereich genutzt werden. Verschiedene Untersuchungen von Präparationsmethoden für die MALDI-MS in Die Einbeziehung der Analytik posttranslationaler Modifikationen in die Charakterisierung komplexer Mischungen ist von grosser Bedeutung im Hinblick auf die Proteomanalyse. Hierzu konnten die Voraussetzungen für einen wichtigen Bereich, den der Phosphopeptide, geschaffen werden. Erstmals wurde der Einfluss der Phosphorylierung, auf das Fragmentierungsverhalten der Peptide bei der MALDI-PSD-MS untersucht und aufgekärt werden.In the present study a universally applicable method was developed to identify and sequence previously unknown peptides in complex mixtures. The complexity of the samples was taken into account by combining various separation methods such as HPLC and CE. This 2-dimensional separation was followed by an automated fraction collection and preparation of the samples for MALDI-MS analysis utilising a self-made manipulator. The direct coupling of CE, which is one of the most sensitive separation techniques, with the automated sample preparation prevents sample loss during transfer steps. The manipulator can also be used as an intelligent pipette for handling samples in the nanoliter range. In order to automate the MALDI-MS sample preparation process, it was necessary to conduct studies with various preparation methods to optimise signal intensities with the peptide behaviour in mixtures. The H/D exchange derivatisation method was also adapted to better handle small sample amounts. The analysis of post-translational modifications is currently a mayor issue in proteomanalysis. This is likely to be the first time that the influence of phosphorylation during the MALDI-PSD process has been studied. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Chemie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 15.02.2001 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 15.02.2001 | |||||||
| Datum der Promotion: | 15.02.2001 |
