Dokument:
Entwicklung von systemisch applizierbaren, endothelspezifischen
Gentransfervektoren
| Titel: | Entwicklung von systemisch applizierbaren, endothelspezifischen Gentransfervektoren | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2228 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20020204-000228-8 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Müller, Gregor [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. med. Schrader, Jürgen [Gutachter] Prof. Dr. Wagner, Rolf [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Endothel,Gentransfer, Gentherapie, Vektor, NO, Rekombination, HUVEC, targeting, invivoHUVEC, endthelial cells, gene transfer, gene therapie, vector, NO,recombination, targeting, in vivo | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibung: | Ziel der Arbeit war es einen spezifischen Gentransfervektor für Endothelzellen zu entwickeln, der systemisch appliziert werden kann. Primäre Endothelzellen wurden in vitro erfolgreich durch eine virales Vektorsystem transfiziert. Zum Nachweis der Transfektion wurde das Gen der murinen induzierbaren Stickstoffmonoxid-Synthase (miNOS) verwendet. Die höchste NO-Expression wurde bei PAEC (pig aortha endothelial cells) und PVSMC (pig vascular smooth muscle cells) zwischen 12 und 24 Stunden nach der Transfektion ge-messen. Die NO-Expressionskinetik bei der Verwendung eines Minimaltiter (MOI: 0,0017) zeigte, dass durch Rekombination zwischen Helfer- und Expressionsvektor vermehrungsfähige Wildtyp Viren ent-standen waren. Die Rekombinationsstelle konnte durch RT-PCR im Übergang zwischen den viralen Genen der Nichtstrukturproteinen und den Strukturproteinen lokalisiert werden. Durch Polyfektion mit nicht-viralen Vektoren aus verzweigten Polyethylenimin (PEI) mit einem Moleku-largewicht von 25 Kilodalton ließen sich primäre Endothelzellen ebenfalls erfolgreich transfizieren. Als optimale Transfektionsbedingung für HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) mit Polyplexen wurde eine DNS-Menge von 1,7 µg/ml bei einem N/P-Wert von 12 und eine Transfektionsdauer von 60 Minuten ohne eine Nachbehandlung durch Chloroquin und / oder DMSO ermittelt. Für Polyplexe aus PEI wurde ein targeting von stimulierten gegenüber unstimulierten primären Endo-thelzellen durch ein VCAM-1 bindendes Peptid gezeigt. Insgesamt wurden 5 verschiedene VCAM-1 bindende Peptide untersucht. Über eine Disulfidbrücke wurden zwischen 2 und 40 Peptide an pro PEI-Molekül gekoppelt. Die Expression von VCAM-1 auf stimulierten HUVEC wurde mittels western-blot und FACS-Analyse untersucht. Die DNS-komplexierenden Eigenschaften des PEI mit gekoppelten targeting-Peptiden wurde durch Gelretardierung nachgewiesen. Eine gesteigerte Toxizität wurde bei den targeting-Polyplexen nicht festgestellt. Neutrale Liposomen aus Phosphatidylcholin (PC), Cholesterin (C) und N-Palmitylphosphatidylethanol-amin (NPPE) mit einer in vivo-Halbwertzeit von 30 Minuten und einer targeting-Möglichkeit wurden aus 18 unterschiedlichen Lipidzusammensetzungen ermittelt. Die Größe, die Halbwertzeit in vitro, und in vivo sowie die Organverteilung nach Injektion in die Schwanzvene von Ratten wurden untersucht. Eine Abhängigkeit der Liposomengröße von der Länge der N-Acylkette konnte nicht festgestellt werden. Die längste Halbwertzeit in vivo von über 30 Minuten wurde bei den N-acylierten PE-Derivaten mit einer gekoppelten Acylkette von 16 Kohlenstoffatomen bei den untersuchten molaren Lipidverhältnissen von (4:3:2) und (16:3:1) erreicht. Die Organverteilung dieser Liposomen aus PC/C/NPPE wurde für die Molverhältnisse (4:3:2) und (16:3:1) untersucht, ohne eine Akkumulation in den analysierten Organen Herz, Lunge, Leber, Niere und Milz fest zustellten. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 04.02.2002 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 04.02.2002 | |||||||
| Datum der Promotion: | 04.02.2002 |
