Dokument: Entwicklung eines rekombinanten
Ganzzellsystems--
Klonierung, Coexpression und Mutagenese der Phenylalanin-Dehydrogenase
aus Rhodococcus sp. M4 und des malic enzymes aus E.coli K12

Titel:	Entwicklung eines rekombinanten Ganzzellsystems-- Klonierung, Coexpression und Mutagenese der Phenylalanin-Dehydrogenase aus Rhodococcus sp. M4 und des malic enzymes aus E.coli K12
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2169
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20021129-000169-8
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Na'amnieh, Shukrallah [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 1,91 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Hummel, Werner [Gutachter] Prof. Dr. Hollenberg, Cornelis P. [Gutachter]
Stichwörter:	Klonierung, Coexpression, Mutagenese,Phenylalanin Dehydrogenase, malic enzyme, L-PhenylalaninCloning, Coexprissing, Mutagenesis, Phenylalanine dehydrogenase, malicenzyme, L-phenylalanine
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	In der vorliegenden Arbeit wurden zwei NAD-abhängige Enzyme, L-Phenylalanin Dehydrogenase (PheDH) aus Rhodococcus sp M4 und das malic enzyme aus E. coli K12 im gleichen Expressionsvektor kloniert und deren Coexpression in E. coli Zellen durchgeführt. Mittels dieser rekombinanten Zellen wurde eine Ganzzellumsetzung zur Herstellung von L-Phenylalanin aus Ketosäure mit einer Ausbeute von über 93% und einem ee-Wert von 100% mit simultaner Regenerierung des Coenzyms NADH erreicht. Ein weiteres Ziel dieser Arbeit war die Veränderung des Mechanismus der PheDH von reduktiver Aminierung zur direkten Reduktion der Ketosäure mittels Zufallsmutagenese. A new method for the enzymatic synthesis of L-phenylalanine from α-keto acids with Escherichia coli cells which express Rhodococcus L-phenylalanine dehydrogenase and E. coli malic enzyme is described. We constructed plasmids containing and coexpressing, in addition to the PheDH gene, the gene for malic enzyme. The continuous production of L-phenylalanine with recombinant E. coli cells resulted in high chemical yields (>93%) and high optical purity (100% enantiomeric excess). Site-specific mutagenesis and directed evolution have been used to create a phenyllactate dehydrogenase from phenylalanine dehydrogenase.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	29.11.2002
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	29.11.2002
Datum der Promotion:	29.11.2002