Dokument: Klonierung und Expression einer
für stereoselektiven Reduktionen einsetzbaren Carbonylreduktase aus
Candida parapsilosis

Titel:	Klonierung und Expression einer für stereoselektiven Reduktionen einsetzbaren Carbonylreduktase aus Candida parapsilosis
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2079
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20011122-000079-9
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Bönitz, Mara [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 1,16 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Kula, Maria-Regina [Gutachter] Prof. Dr. Gellissen, Gerd [Gutachter]
Stichwörter:	NADH-abhängige Carbonylreduktasen, rekombinante Herstellung inE.coli, chirale Hydroxyverbindungen, Enantiomerenreine Verbin-dungen,Candida parapsilosis, medium chain Alkoholdehydrogenasen, Enzym-gekoppelteCofaktorregenerierungNADH-dependent carbonylreductases, recombinant production ofenzymes in E.coli, chiral hydroxy compounds, enantiomericcompounds,Candida parapsilosis, medium chain alcohol dehydrogenases,enzyme coupled cofactor regeneration
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	Dehydrogenasen stellen ideale Biokatalysatoren zur Synthese chiraler, enantiomerenreiner Substanzen aus prochiralen Vorstufen dar. Dazu gehört die 1992 erstmals beschriebene NADH-abhängige Carbonylreduktase aus Candida parapsilosis (wtCPCR). Im Rahmen dieser Arbeit wurde das Wildtypenzym biochemisch charakterisiert und erstmals homogen dargestellt. Über Sequenz- daten und Hommolgien zu anderen Dehydrogenasen konnte das Enzym rekombinant in E.coli (recCPCR)hergestellt werden. Die spezifi- sche Aktivität des rekombinanten Enzyms steigerte sich dadurch um das 10-fache im Vergleich zu der wtCPCR. Die rekombinante Form zeigt die gleichen biochemischen und enzymologischen Eigenschaften wie die wtCPCR. Nachteilig war allerdings ein hoher Anteil an sogenannten Inclusion Bodies und Plasmid-instabilitäten, die auch durch zahlreiche Optimierungsarbeiten nur geringfügig reduziert werden konnten. Zur Bereitstellung des rekombinanten Proteins wurden verschiedene Fermentations-verfahren ausgearbeitet. Dehydrogenases are ideal biocatalysts for the synthesis of ciral, pure enantiomeric compounds. Thereto belongs the NADH-dependent carbonyl reductase of Candida parapsilosis (WTCPCR), which was first described in 1992. In context with this dissertation, the wildtype carbonyl reductase was characterized biochemically and firstly homogen purified. By sequencing datas and homologies to other dehydrogenases, the carbonyl reductase was produced recombinant in E.coli (recCPCR). This increased its specific activity about a factor of 10 compared to the wildtype enzyme. The recombinant form showed the same biochemical and enzymatic characteristics as the wtCPCR. Disadvantageous was a high amount of so called inclusion bodies and plasmid instabilities, which could be only reduced fractionally although working out a numerous contigent of optimisation works. For the supply of recombinant protein, different fermentation procedures were tested.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	22.11.2001
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	22.11.2001
Datum der Promotion:	22.11.2001