Dokument: Der heptahelikale Transmembran-Rezeptor HC110-R aus dem parasitischen Nematoden Haemonchus contortus als Target für das Breitspektrum-Anthelminthikum PF1022A

Titel:	Der heptahelikale Transmembran-Rezeptor HC110-R aus dem parasitischen Nematoden Haemonchus contortus als Target für das Breitspektrum-Anthelminthikum PF1022A
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2033
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20001212-000033-5
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Saeger, Beate [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 1,39 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:	Prof. Dr. Wunderlich, Frank [Gutachter] PD Dr. Dr. Harder, Achim [Gutachter] Prof. Dr. Schnieder, T. [Gutachter]
Stichwörter:	Haemonchus contortus, Anthelminthikum, Latrophilin, Calcium-Signaltransduktion,alpha-Latrotoxin, Secretin-Rezeptor, G-Protein gekoppelter Rezeptor, PF1022A, schwarze Witwe, DepsipeptidHaemonchus contortus,GPCR, G-protein coupled receptor, calcium signalling, anthelmintic, depsipeptide, latrophilin, latrotoxin, Latrodectus,PF1022A
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibungen:	Abstract: Zur Identifizierung möglicher Zielproteine für das neue Anthelminthikum PF1022A wurde ein Liganden-Immunscreening mit einer cDNA-Expressionsbibliothek des parasitischen Nematoden Haemonchus contortus durchgeführt. Dabei wurde als putativer Bindungspartner für PF1022A das 110 kDa große heptahelikale Transmembranprotein HC110-R isoliert. Im Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß HC110-R einen zellulären Rezeptor und damit ein mögliches Targetprotein für PF1022A darstellt. Da bislang keine Zellkulturlinien von H. contortus und anderen Nematoden zur Verfügung stehen, wurde ein HC110-R-Expressionsmodell in verschiedenen Säuger-Zellkulturlinien etabliert, um Untersuchungen zur Bindung des PF1022A-Liganden an HC110-R durchzuführen. HC110-R zeigt Sequenzähnlichkeiten zu Vertretern der Secretin-Familie G-Protein gekoppelter Rezeptoren, insbesondere zu dem Latrophilin-Rezeptor, dessen artifizieller Ligand das Neurotoxin alpha-Latrotoxin (alpha-LTX) ist. Durch konfokale Laserscanning-Mikroskopie wurde HC110-R in transfizierten HEK-293- und COS-7-Zellen an der Plasmamembran und in sauren Lysosomen lokalisiert. alpha-Latrotoxin zeigte als artifizieller Ligand im Western Blot eine spezifische Bindung an die N-Termini von HC110-R und Latrophilin. In HC110-R transfizierten HEK-293-Zellen führte alpha-Latrotoxin dosisabhängig zu einer Erhöhung der intrazellulären freien Calcium-Konzentration. Dabei erfolgte durch 75 nM alpha-Latrotoxin ein maximaler Einstrom von extrazellulärem Calcium über Cadmium und Nifedipin inhibierbare Kanäle. Die agonistische Wirkung von alpha-Latrotoxin auf HC110-R erwies sich als spezifisch, da das Neurotoxin weder Veränderungen in nicht transfizierten HEK-293-Zellen, noch in Zellen, die mit einem beta2-adrenergen Reze Durch Liganden-Präzipitation und Western Blot-Analyse mit biotinyliertem PF1022A wurde eine spezifische Bindung an den N-Terminus von HC110-R nachgewiesen. PF1022A beeinflußte die durch alpha-Latrotoxin vermittelte Calcium-Signaltransduktion von HC110-R antagonistisch, indem es dosisabhängig den Calcium-Import in die Zelle erniedrigte bis vollständig unterdrückte. PF1022A nahm außerdem keinen Einfluß auf die Liganden-induzierte Calcium-Erhöhung, die durch endogene beta2-adrenerge, muscarinische oder nicotinische Rezeptoren vermittelt wurde. Offenbar ist HC110-R ein zelluläres Target-Protein für PF1022A. PF1022A belongs to a new class of cyclodepsipeptides with broad anthelmintic activity. Here, I describe a novel target for PF1022A. Using PF1022A ligand-immunoscreening of a cDNA library constructed from the parasitic nematode Haemonchus contortus I identified a 3539 bp cDNA encoding a novel orphan hepathelical transmembrane 110 kDa-receptor, termed HC110-R, with similarity to the mammalian G-protein coupled receptor latrophilin. HC110-R is localized at plasma membranes and in intracellular vesicles of HC110-R-transfected HEK-293 cells. The artificial ligand of latrophilin, alpha-latrotoxin (LTX), binds to the extracellular N-terminal region of HC110-R and induces influx of external Calcium through Cadmium- and nifedipine-blockable Calcium channels. PF1022A also binds to the N-terminus of HC110-R and acts as an antagonist to LTX signalling in HC110-R transfected HEK-293 cells.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:	12.12.2000
Dateien geändert am:	12.02.2007
Promotionsantrag am:	12.12.2000
Datum der Promotion:	12.12.2000