Dokument: Promotorhypermethylierung und verminderte Expression des NDRG2-Gens in primären Glioblastomen

Titel:	Promotorhypermethylierung und verminderte Expression des NDRG2-Gens in primären Glioblastomen
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=17537
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20110318-101540-9
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Tepel, Martin [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,24 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 16.03.2011 / geändert 16.03.2011
Beitragende:	Prof. Dr. Reifenberger, Guido [Gutachter] Prof. Dr. Haas, Rainer [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibungen:	Die vorliegende Doktorarbeit beschäftigt sich mit Untersuchungen zur Rolle des Gens N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) auf 14q11.2 in der Pathogenese von astrozytären Gliomen des Erwachsenenalters. Hierbei sollte insbesondere der Frage nachgegangen werden, welche molekularen Mechanismen der in der Literatur beschriebenen verminderten Expression von NDRG2 in Glioblastomen zugrundeliegen. Insgesamt wurden 67 humane astrozytäre Tumoren untersucht, darunter 10 diffuse Astrozytome WHO-Grad II, 11 anaplastische Astrozytome WHO-Grad III, 12 sekundäre Glioblastome WHO-Grad IV und 34 primäre Glioblastome WHO-Grad IV. Aus Gewebeproben der Tumoren wurden DNA und RNA isoliert und mittels Real-time Reverse Transkriptions-PCR die Expression des NDRG2-Transkripts quantitativ bestimmt. Eine Mutationsanalyse dieses Gens erfolgte durch SSCP-Analysen und nachfolgende DNA-Sequenzierung. Hieran schloss sich eine Allelverlustanalyse zum Nachweis von Verlusten der Heterozygotie am NDRG2-Genlokus an. Die Bestimmung des Methylierungsstatus der NDRG2-Promotorregion erfolgte durch Sequenzierung Natriumbisulfit-behandelter DNA. Die Untersuchungen wurden durch die immunhistochemische Darstellung der NDRG2-Proteinexpression nach Inkubation mit einem NDRG2-spezifischen polyklonalen Antikörper an Schnittpräparaten ergänzt. Die eigenen Experimente bestätigten eine verminderte Expression von NDRG2 auf mRNA- und Proteinebene in Glioblastomen im Vergleich zu normalem Hirngewebe und WHO-Grad II und III Gliomen. Es fanden sich jedoch keine Mutationen oder gehäuften Allelverluste in den untersuchten Tumoren. Als molekulare Ursache der verminderten Expression zeigte sich eine Hypermethylierung der NDRG2-Promotorregion in 62 % der untersuchten primären Glioblastome. Im Unterschied hierzu wiesen sekundäre Glioblastome und diffuse Astrozytome keine Hypermethylierung des NDRG2 Promotors auf. Unter den anaplastischen Astrozytomen fiel lediglich ein Tumor mit NDRG2-Promotorhypermethylierung auf. Der Zusammenhang zwischen aberranter Methylierung des NDRG2-Promotors und erniedrigter NDRG2-Expression erwies sich als statistisch signifikant. Zusammenfassend sprechen die eigenen Befunde somit dafür, dass NDRG2 ein Tumorsuppressorgen ist, dessen Transkription und Expression in der Mehrheit primärer Glioblastome durch eine aberrante Methylierung seiner Promotorregion herunterreguliert wird und dadurch zur Pathogenese von primären Glioblastomen, den häufigsten ZNS-eigenen Tumoren des Erwachsenenalters, beiträgt. The N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) at 14q11.2 has been reported to be downregulated in glioblastoma, and NDRG2 overexpression represses glioblastoma cell proliferation in vitro (Deng et al., Int J Cancer 2003;106;342–7). To further address the role of NDRG2 as a candidate tumor suppressor in human gliomas, we analyzed 67 astrocytic tumors (10 diffuse astrocytomas, 11 anaplastic astrocytomas, 34 primary glioblastomas and 12 secondary glioblastomas) for NDRG2 gene mutation, promoter methylation and expression at the mRNA and protein levels. Using real-time reverse transcription PCR analysis, we found decreased NDRG2 mRNA levels in primary glioblastomas as compared to diffuse and anaplastic astrocytomas. Similarly, immunohistochemistry revealed low or absent NDRG2 protein expression in primary glioblastomas. Mutational analysis of the entire NDRG2 coding sequence did not reveal any tumor-associated DNA sequence alterations. However, sequencing of sodium bisulfitemodified DNA identified hypermethylation of the NDRG2 promoter region in 21 of 34 primary glioblastomas (62%). Moreover, NDRG2 promoter hypermethylation was associated with decreased NDRG2 mRNA expression. In contrast to primary glioblastomas, NDRG2 promoter hypermethylation was detected in only 1 of 11 anaplastic astrocytomas (9%) and was absent in 10 diffuse astrocytomas and 12 secondary glioblastomas. Taken together, our data support NDRG2 as a candidate tumor suppressor gene that is epigenetically silenced in the majority of primary glioblastomas, but
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	18.03.2011
Dateien geändert am:	18.03.2011
Promotionsantrag am:	18.08.2010
Datum der Promotion:	01.03.2011