Dokument: Faktoren, die die Expression von Rezeptoren auf Natürlichen Killerzellen regulieren
| Titel: | Faktoren, die die Expression von Rezeptoren auf Natürlichen Killerzellen regulieren | |||||||
| Weiterer Titel: | Factors which are involved in the regulation of the expression of receptors in natural killer cells | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=12645 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20091014-110605-7 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Deutsch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Henger, Christa [Autor] | |||||||
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| Beitragende: | Prof. Dr. Markus Uhrberg [Gutachter] Prof. Dr. Frank Wunderlich [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Natürliche Killerzellen, NK-Zellen, PLZF, ITGB4 | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibungen: | Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die Identifizierung von Faktoren, die an der Regulation der Expression von Rezeptoren in Natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) beteiligt sind. Hierzu wurden mithilfe von subtraktiven cDNA-Banken NK- (NK3.3-) und T- (Jurkat-) Zelllinien verglichen, sowie frisch isolierte und kultivierte NK-Zellen und CD8+ T-Zellen. Für NK3.3-Zellen konnten drei Transkriptionsfaktoren (BHLHB2, ITF2, und PSCDBP) als signifikant differentiell exprimiert gegenüber Jurkat-Zellen identifiziert werden. Weiterhin wurden für NK-Zellen gegenüber CD8+ T-Zellen mehrere Faktoren erstmalig als differentiell exprimiert identifiziert: SMARCF1, welches die Transkription durch Veränderung der Chromatinstruktur reguliert; TCEB1, das an der Transkription beteiligt ist; EIF2S3, ein an der Translation beteiligter Faktor; sowie vier Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren: RREB1, ZNF211, ZNF236 und PLZF (ZNF145).
Basierend auf diesen Ergebnissen wurde die Rolle von PLZF (ZNF145), welches 29-fach stärker in NK- als in CD8+T-Zellen exprimiert wurde, näher untersucht. Bisher wurde dieser Faktor vor allem als Repressor im Rahmen verschiedener Differenzierungsprozesse (Keimzellentwicklung, Osteogenese) und als Translokationspartner von Retinolsäure-Rezeptor-a bei akuter promyeloischer Leukämie beschrieben. Es zeigte sich, dass PLZF in kultivierten primären NK-Zellen sowie NK-Zelllinien wesentlich schwächer als in frisch isolierten NK-Zellen aus peripherem Blut exprimiert wurde. Untersuchungen zur Genregulation zeigten, dass die Expression von PLZF in den NK-Zelllinien durch chemische Blockade der DNA Methyltransferasen und/oder Histondeacetylasen mit Azacytidin und Trichostatin induziert werden kann. Die Untersuchung der Expressionskinetik von PLZF zeigte, dass im Verlauf der Kultivierung von ruhenden NK-Zellen mit IL-2 schon nach 24h eine signifikante Abnahme der Transkriptmenge stattfand. Parallel dazu wurde die Expression der bisher bekannten von PLZF regulierten Gene, c-myc, Cyclin A2 und IL-3Ra untersucht. Hierbei konnte gezeigt werden, dass die Transkriptmenge an c-myc und Cyclin A2 im Verlauf der Kultivierung der NK-Zellen erwartungsgemäß zunimmt. Darüberhinaus konnte für Cyclin A2 und IL-3Ra in NK-Zellen eine direkte Bindung von PLZF in der Promotorregion mithilfe der ChIP-Technologie nachgewiesen werden. Somit kann für c-myc, Cyclin A2 und IL-3Ra eine Regulation durch PLZF in NK-Zellen angenommen werden. Schließlich konnte mithilfe der ChIP-and-clone Technik in NK-Zellen eine Bindung von PLZF an ein neues Zielgen, das Integrin ITGB4 (CD104), nachgewiesen werden, dessen Expression u.a. mit der Metastasierung invasiver Tumoren in Verbindung gebracht wird.The aim of the present work was the identification of factors which are involved in the regulation of the expression of receptors in natural killer cells (NK cells). NK (NK3.3) and T (Jurkat) cell lines, as well as fresh isolated and cultured primary NK cells and CD8+ T cells were compared by establishing subtractive cDNA libraries. For NK3.3 cells three transcription factors (BHLHB2, ITF2, and PSCDBP) could be identified as significant differentially expressed compared to Jurkat cells. Furthermore several factors were identified for the first time as differentially expressed in NK cells compared to CD8+ T cells: SMARCF1 which regulates gene transcription by altering the chromatin structure; TCEB1 which is involved in transcription; EIF2S3, a factor involved in translation; as well as four zinc finger transcription factors: RREB1, ZNF211, ZNF236 and PLZF (ZNF145). Based on these results the role of PLZF (ZNF145) which is expressed 29-fold stronger in NK- than in CD8+ T cells, was examined. Up to now this factor was described as a repressor involved in different differentiation processes (germ cell development, osteogenesis) and as translocation partner of retinoic acid receptor α with acute promyeloic leukaemia. It appeared that the expression of PLZF in cultured primary NK cells as well as NK cell lines was significantly decreased compared to fresh-isolated NK cells from peripheral blood. Investigations of the genetic regulation showed that the expression of PLZF in the NK cell lines can be induced by chemical blockade of the DNA methyltransferases and/or histondeacetylases with azacytidin and trichostatin. Investigation of the expression kinetics of PLZF during the cultivation of quiescent NK cells with IL-2 showed a significant decrease in expression after only 24h. In addition the expression of the up to now known genes regulated by PLZF, c-myc, Cyclin A2 and IL-3Rα was examined. As expected an increase in transcript level of c-myc and Cyclin A2 during the cultivation of the NK cells could be shown. By use of the ChIP-technology a direct binding by PLZF in the promotor region could be shown for Cyclin A2 and IL-3Rα in NK cells. Therefore a regulation could be shown for c-myc, Cyclin A2 and IL-3Rα by PLZF in NK cells. Finally with the help of the ChIP-and-clone technology, a new target-gene of PLZF was found, the integrin ITGB4 (CD104), whose expression is associated with the metastasis of invasive tumours. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Transplantationsdiagnostik und Zelltherapeutika (ITZ) | |||||||
| Dokument erstellt am: | 14.10.2009 | |||||||
| Dateien geändert am: | 30.09.2009 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 01.08.0008 | |||||||
| Datum der Promotion: | 11.12.0008 |
