Dokument: Expression, Reinigung und molekulare Charakterisierung des Proteins ETHYLENE INSENSITIVE 2 (EIN2)

Titel:	Expression, Reinigung und molekulare Charakterisierung des Proteins ETHYLENE INSENSITIVE 2 (EIN2)
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=10531
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20090324-092225-5
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Allekotte, Silke [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 5,07 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 27.02.2009 / geändert 27.02.2009
Beitragende:	Prof. Dr. Groth, Georg [Gutachter] Prof. Dr. Simon, Rüdiger [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:	Das Phytohormon Ethylen ist in der Pflanze an der Regulation einer Vielzahl physiologischer Prozesse der Pflanzenentwicklung wie an der Kontrolle von Fruchtreife, Blattfall und anderen Senezenzprozessen beteiligt und spielt daher agrarökonomisch eine wichtige Rolle Molekulargenetische Studien in Arabidopsis thaliana haben zu der Entwicklung eines Modells für die Signaltransduktion von Ethylen geführt, in dem zwar die an der Signalwahrnehmung und Weiterleitung beteiligten Proteine identifiziert werden konnten, doch die molekularen Mechanismen der einzelnen Schritte der Signaltransduktion sind noch weitestgehend ungeklärt blieben. Für die Untersuchungen des zugrunde liegende Mechanismus kann jedoch nicht auf indirekte, genetische Methoden zurückgegriffen werden, sondern sie erfordern Analysen zu Struktur und Funktion an isolierten Proteinen. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein Reinigungsprotokoll entwickelt, mit dem der putativ membran-extrinsische Bereich des EIN2-Proteins, der ca 63 % des Gesamtproteins ausmacht, in ausreichender Menge für funktionelle Untersuchungen isoliert werden konnte. Eine erste strukturelle Charakterisierung des EIN2-Fragments wurde durch die Untersuchung der Sekundärstruktur mittels Zirkular Dichroismus (CD) Spektroskopie durchgeführt. In der vorliegenden Arbeit ist es erstmals gelungen, wichtige Hinweise auf die Funktion des EIN2 Proteins zu erhalten. In funktionellen Untersuchungen konnte sowohl mikrokalorimetrisch als auch fluoreszenzspektroskopisch die Bindung zweiwertiger Kationen an mindestens zwei verschiedenen Typen von Bindungsstellen nachgewiesen werden und somit ein Zusammenhang mit der postulierten Sensorfunktion des Proteins für Metallionen hergestellt werden. Durch sequenzbasierte Suche für Kalziumsbindungsstellen konnten sieben putative EF-hand-Motive in EIN2 479-1294 identifiziert werden. Die experimentell bestimmten Dissoziations-konstanten für Kalzium und Magnesium unterstützten einen postulierten Bindungs-mechanismus in EIN2 über EF Hand-Motive. Ein weiteres Argument für die Ionenbindung über dieses Motiv sind die durch Kalziumionen induzierten Konformationsänderungen in a-helikalen Bereichen von EIN2 479-1294.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie » Biochemie der Pflanzen
Dokument erstellt am:	11.03.2009
Dateien geändert am:	27.02.2009
Promotionsantrag am:	20.05.2008
Datum der Promotion:	27.06.2008