Dokument: Funktionsanalyse des Saccharomyces cerevisiae Proteins Fgy1 und dessen Einfluss auf die heterologe Expression der Glukosetransporter GLUT1 und GLUT4 aus Säugetieren

Titel:Funktionsanalyse des Saccharomyces cerevisiae Proteins Fgy1 und dessen Einfluss auf die heterologe Expression der Glukosetransporter GLUT1 und GLUT4 aus Säugetieren
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URN (NBN):urn:nbn:de:hbz:061-20050627-001133-0
Kollektion:Dissertationen
Sprache:Deutsch
Dokumententyp:Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:Text
Autor: Voss, Dörthe [Autor]
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Dateien vom 09.02.2007 / geändert 09.02.2007
Beitragende:Prof. Dr. Hollenberg, Cornelis P. [Gutachter]
Prof. Dr. Bünemann, Hans [Gutachter]
Prof. Dr. Boles, Eckhard [Gutachter]
Stichwörter:Saccharomyces cerevisiae, Fgy1, GLUT1, GLUT4, heterologe Expression
Dewey Dezimal-Klassifikation:500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie
Beschreibung:Im Rahmen der vorliegenden Dissertation sollte die Funktion des bislang unbekannten Proteins Fgy1/Efr3 aus der Hefe S. cerevisiae charakterisiert werden. Die Funktionsanalyse des Proteins wurde für unterschiedliche zelluläre Prozesse der Hefe durchgeführt. Eine Klärung der Funktion von Fgy1 sollte helfen, seinen inhibitorischen Effekt auf die Funktionalität der heterolog in Hefe exprimierten Glukosetransporter GLUT1 und GLUT4 aus Säugetieren zu verstehen. Saccharosedichtegradientenzentrifugationsexperimente und Nachweis eines Fgy1-GFP Fusions-proteins deuteten auf eine Lokalisierung von Fgy1 an der Plasmamembran bzw. in endosomalen Vesikeln hin. Phänotyp-Microarray-Analysen eines fgy1-Deletionsstammes zeigten eine pleiotrophe Funktion des Proteins an. In verschiedenen Experimenten konnte ein genereller Einfluss von Fgy1 auf den intrazellulären Transport von Plasmamembranproteinen oder die Phospholipidzusammensetzung der Plasmamembran ausgeschlossen werden. Untersuchungen des PHO-Signalweges deuteten auf eine Funktion von Fgy1 bei der Phosphataufnahme hin. Mittels einer Transposongenbank wurden mit HTA1 und CTR9 weitere Gene gefunden, deren Deletion eine funktionelle Expression von GLUT1 in der Hefe erlauben. Die Produkte beider Gene spielen eine Rolle in der Transkription. Aber weder für die hta1-Deletion noch die fgy1-1 Mutation konnte ein Effekt auf den Expressionslevel des GLUT1-Proteins nachgewiesen werden. Einen ebenfalls positiven Effekt auf die funktionelle Expression von GLUT1 zeigte eine Deletion von ERG6, das für die C-24 Sterol-Methyltransferase im Ergosterolbiosyntheseweg kodiert. Untersuchungen mit Sekretionsmutanten der Hefe deuteten auf eine Funktion von Fgy1 bei der Fusion von sekretorischen Vesikeln mit der Plasmamembran nach der Bildung des SNARE-Komplexes. Auch der Nachweis einer fehlenden Zugänglichkeit des GLUT1-Proteins von ausserhalb der Zelle über Modifizierung mit TNBS und anschließende Detektion von GLUT1 ließ darauf schließen, dass das Fgy1 Protein eine korrekte Insertion von GLUT1 in die Plasmamembran der Zellen verhindert. Rekonstitution des Transporters in Liposomen ergab jedoch eine von Fgy1 unabhängige Glukosetransportaktivität. Eine Blockierung der Endozytose in rsp5-Mutantenstämmen der Hefe führte nicht zu einer funktionellen Expression von GLUT1. Zusammengefasst deuten die Ergebnisse auf eine Beteiligung von Fgy1 bei der Fusion von sekretorischen Vesikeln mit der Plasmamembran. Es wurden einige Hinweise erhalten, die dafür sprechen, dass Fgy1, nachdem post-Golgi Vesikel über den SNARE-Komplex an die Membran gebunden wurden, eine regulatorische Funktion dahingehend ausübt, welche Proteine in die Plasmamembran inseriert werden.
Lizenz:In Copyright
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Fachbereich / Einrichtung:Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie
Dokument erstellt am:27.06.2005
Dateien geändert am:12.02.2007
Promotionsantrag am:12.04.2005
Datum der Promotion:12.04.2005
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