Dokument: Untersuchung von PKCα als Schlüsselprotein der β-Arrestin2 vermittelten Nephrin-Endozytose

Titel:	Untersuchung von PKCα als Schlüsselprotein der β-Arrestin2 vermittelten Nephrin-Endozytose
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=29980
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20140711-091814-8
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Palmer, Romy [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 2,03 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 10.07.2014 / geändert 10.07.2014
Beitragende:	PD Dr. med. Ivo Quack [Gutachter] Prof. Dr. Matthias Schott [Gutachter]
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Studien zur Pathogenese der diabetischen Nephropathie konnten zeigen, dass das transmembranäre Protein Nephrin eine zentrale Rolle bei primären Veränderungen an der Schlitzmembran, welche zur Entwicklung von Mikroalbuminurie führen, einnimmt. Für ein besseres Verständnis der molekularen Mechanismen der Entstehung der diabetischen Nephropathie sind die Erforschung der beteiligten Proteine und deren Interaktoren entscheidend. Ziel der Arbeit ist es, die Rolle von Hyperglykämie für die Endozytose von Nephrin zu charakterisieren und Interaktionspartner zu identifizieren. Dazu wurden Co-Immunopräzipitations-Experimente mit HEK 293T-Zellen, immortalisierten murinen Podozyten sowie Nierenlysat aus C57Bl/6-Mäusen durchgeführt. Nephrin interagiert mit dem zytosolischen Protein β-Arrestin2, welches die Endozytose von Nephrin einleitet und zur Internalisierung von Nephrin führt. Durch die Endozytose von Nephrin wird der glomeruläre Filter durchlässig, welches zur Entwicklung einer Albuminurie führt. Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass die Interaktion von Nephrin mit β-Arrestin2 unter hohen Glukosespiegeln verstärkt wird. Dabei spielen PKCα und PICK1 eine entscheidende Rolle für die Endozytose von Nephrin und es konnte aufgezeigt werden, dass sie einen Komplex mit Nephrin und β-Arrestin2 bilden. PICK1 bindet dabei mit seiner PDZ-Domäne an die Nephrin-Domäne 1160-1176 und kann so als Adapter PKCα an den C-Terminus von Nephrin rekrutieren. Die Verwendung des PKCα-Inhibitors Safingol schwächt die Bindung von β-Arrestin2 an Nephrin nachweislich. Es konnte nachgewiesen werden, dass es unter hohen Glukosespiegeln unmittelbar zu einer Hochregulation von PKCα in Maus-Podozyten kommt. Des Weiteren konnte gezeigt werden, dass der Nephrin/PKCα/PICK1/β-Arrestin2-Proteinkomplex auch in vivo eine entscheidende Rolle spielen könnte. Endogenes β-Arrestin2 präzipitiert endogenes Nephrin in konzentrationsabhängiger Weise. In PKCα-defizienten Maus-Podozyten konnte nur eine schwache Bindung von β-Arrestin2 festgestellt werden, welches die regulatorische Rolle von PKCα für die Nephrin-β-Arrestin2-Bindung unterstreicht. Zusammenfassend bieten die von uns identifizierten Signalwege ein molekulares Modell für die Hyperglykämie-induzierte Nephrin-Endozytose und daraus folgende Mikroalbuminurie.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	11.07.2014
Dateien geändert am:	11.07.2014
Promotionsantrag am:	11.07.2013
Datum der Promotion:	26.06.2014