Dokument: Einfluss von Sphingosin-1-Phosphat auf die Expression der Thrombinrezeptoren PAR-1 und PAR-4 in humanen Monozyten

Titel:	Einfluss von Sphingosin-1-Phosphat auf die Expression der Thrombinrezeptoren PAR-1 und PAR-4 in humanen Monozyten
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=28029
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20140106-130223-8
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Sostmann, Björn Dirk [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 9,44 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 06.01.2014 / geändert 06.01.2014
Beitragende:	Prof. Dr. med. Rauch, Bernhard [Betreuer/Doktorvater] Prof. Dr. med. Schott, Matthias [Gutachter]
Stichwörter:	Sphingosin-1-Phosphat, PAR-1, PAR-4, Monozyten
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Die Serinprotease Thrombin besitzt neben seiner wichtigen Funktion im Ablauf der Hämostase weitere zelluläre Wirkungen. Beispielweise im Rahmen von Entzündungen wie der Atherosklerose. Thrombin wirkt über G-Protein-gekoppelte Rezeptoren, den sog. Protease-aktivierten Rezeptoren, von denen insgesamt vier bekannt sind. Das bioaktive Sphingolipid Sphingosin-1-Phosphat wird von Thrombozyten, Erythrozyten sowie Endothelzellen gebildet und spielt in zahlreichen biologischen Prozessen eine wichtige Rolle. In der hier vorliegenden Arbeit wurde die Thrombinrezeptorausstattung von Monozyten untersucht und einem möglichen Einfluss von S1P hinsichtlich einer Wirkung auf Thrombinrezeptoren in humanen Monozyten bzw. monozytären U937 Zellen nachgegangen. Es wurden mRNA-Analysen durch qPCR, Proteinanalysen durch Western-Blotting und Durchflusszytometrie sowie Chemotaxismessungen mittels einer modifizierter Boydenkammer durchgeführt. Sowohl monozytäre U937-Zellen als auch humane Monozyten exprimieren die Thrombinrezeptoren PAR-1 und PAR-4, jedoch enthalten Monozyten nur ca. ein Fünfzigstel PAR-4-mRNA bezogen auf die PAR-1-mRNA. S1P (1µM) führte in den Zellen zu einer verstärkten Expression beider Rezeptoren auf mRNA-Ebene mit einem Maximum für den PAR-1 nach 16 h (2,2-fach) und den PAR-4 nach 6 h (2,9-fach). Dabei zeigte die Isolationsmethode (Positiv-vs. Negativ-Isolation) von humanen Monozyten aus Vollblut keinen Einfluss auf die induzierte Expression. Auf Proteinebene zeigten sich ähnliche Befunde nach S1P-Stimulation mit einem Maximum der Proteinexpression für den PAR-1 nach 24 h (2,6-fach) und für den PAR-4 nach 6 h (1,6-fach). Auffällig war, dass es in den durchflusszytometrischen Analysen zu keinem Anstieg von PAR-1 an der Zelloberfläche kam, wohingegen es zu einem erwartungsgemäßen PAR-4-Anstieg an der Zelloberfläche kam. Der Grund für den fehlenden Transport des vermehrt gebildeten PAR-1-Proteins an die Zelloberfläche bleibt unklar und bedarf weiterer Abklärung. Durch die PAR-4-Induktion in Monozyten durch S1P kommt es zu einer verstärkten chemotaktischen Wirkung von Thrombin. So steigt die Migration von S1P vorbehandelten Monozyten um 40 % in Richtung Thrombin (3 U/ml) verglichen zur Kontrollgruppe. Dass dieser Effekt selektiv durch die Aktivierung des PAR-4 ausgelöst wird, konnte durch den Einsatz von spezifischen PAR-aktivierenden Peptiden (AP) nachgewiesen werden. So führte der Einsatz eines hochspezifischen PAR-4-AP ebenfalls zu einer um 50 % gesteigerten Migration in Richtung des Peptids. Die alleinige Gabe eines spezifischen PAR-1-AP zeigte keinerlei Wirkung auf die Migration von Monozyten. Zusammenfassend resultiert die PAR-Induktion durch S1P in einer verstärkten Migration in Richtung Thrombin (3 U/ml), welche auf eine selektive PAR-4-Aktivierung zurückzuführen ist. Da sowohl S1P als auch Thrombin immer mehr in den Fokus als pharmakologische Targets in der Therapie verschiedenster Erkrankungen (z.B. Multiple Sklerose, Thrombembolien) gelangen, sind weitere Untersuchungen bezüglich der biologischen Funktionen beider Stoffe vonnöten.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät
Dokument erstellt am:	06.01.2014
Dateien geändert am:	06.01.2014
Promotionsantrag am:	17.12.2012
Datum der Promotion:	17.12.2013