Dokument: The role of annexin A1 in the activation and transport of the EGF receptor
| Titel: | The role of annexin A1 in the activation and transport of the EGF receptor | |||||||
| URL für Lesezeichen: | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=2669 | |||||||
| URN (NBN): | urn:nbn:de:hbz:061-20031208-000669-9 | |||||||
| Kollektion: | Dissertationen | |||||||
| Sprache: | Englisch | |||||||
| Dokumententyp: | Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation | |||||||
| Medientyp: | Text | |||||||
| Autor: | Radke, Susanne [Autor] | |||||||
| Dateien: |
| |||||||
| Beitragende: | Dr. Russo-Marie, Françoise [Gutachter] Prof. Dr. Wunderlich, Frank [Gutachter] | |||||||
| Stichwörter: | Annexine, EGF-Rezeptor, intrazellulärer Transport, Kalzium, Signaltransduktionannexins, EGF receptor, intracellular trafficking, calcium, signaling | |||||||
| Dewey Dezimal-Klassifikation: | 500 Naturwissenschaften und Mathematik » 570 Biowissenschaften; Biologie | |||||||
| Beschreibungen: | ANX A1 ist ein Mitglied der Annexin-Proteinfamilie, die in Kalzium-abhänginger Weise mit Phospholipiden interagieren kann. Annexine bestehen aus einem hochkonservierten Proteinkern, der über Kalziumbrücken an Membranen bindet und aus einer Domäne am aminoständigen Proteinende,? die hohe Variabilität betreffend Aminosäuresequenz und Peptidlänge aufzeigt und spezifische Stellen für post-translationale Modifizierungen enthält. ANX A1 ist ein EGF-Rezeptor-Substrat (EGF-R). Seine Phoshorylierung kann eine Veränderung biochemischer Eigenschaften und eine erhöhte Sensibilisierung für Proteolyse auslösen. Die innerzelluläre Funktion von ANX A1 ist unbekannt, obwohl über eine Beteiligung in der Zellteilung, Signalübertragung, Bildung von Membran-Aggregaten und Vesikelfusion während Endozytose berichtet wurde. Tatsächlich ist vollständiges ANX A1 auf frühen und der Proteinkern auf späten Endosomen lokalisiert worden. Außerdem scheint ANX A1 in multivesikulären Körpern vorzukommen, in denen eine Phoshorylierung durch den EGF-R einen Effekt auf den Transport des Rezeptors zu Lysosomen haben kann. In der hier präsentierten Studie wurde die Bedeutung von ANX A1 während des EGF-R-Transports untersucht. Indem eine HeLa-Zellinie verwendet wurde, die eine induzierbare dominant-negative Dynaminmutante exprimierte, wurde gezeigt, dass ANX A1 und der EGF-R in EGF-stimulierten oder -unstimulierten Zellen im gleichen Proteinkomplex vorkommen. Der ANX A1-Proteinkern ist dabei eine ausreichende Interaktionsfläche. Außerdem wird ein aminoständiger Abbau von ANX A1 während der EGF-R-Internalisierung und des endozytotischen Transports hervorgerufen. Der Phosphorylierungsstatus des gesamten zellulären ANX A1-Vorkommens wird nicht durch die EGF-Behandlung beeinflusst. Eine Tyrosinphoshorylierung war sogar in Wachstumsfaktorabwesenheit detektierbar. Stark phosphoriliertes ANX A1 konnte nach 15-minütiger EGF-Behandlung detektiert werden, allerdings nur in Zellen mit funktionierender dynaminabhängiger Rezeptorendozytose. Deswegen kann angenommen werden, dass die ANX A1-Phoshorylierung in endosomalen Strukturen stattfand. ANX A1-defiziente Zellen zeigen einen langsameren EGF-Transport als ANX A1-exprimierende Zellen, obwohl biochemische Ansätze nicht gezeigt haben, dass ein verspäteter EGF-R-Abbau in ANX A1-defizienten Zellen erfolgt. Zusammenfassend interagiert ANX A1 mit dem EGF-R während seines gesamten innerzellulären Transports, welcher durch seinen Abbau in Lysosomen beendet wird. Dieses könnte bedeuten, dass ANX A1 an der Aggregation von Membranen und an der Endosomenreifung beteiligt wäre.ANX A1 is a member of the annexin family of proteins that are able to interact with phospholipids in a Ca2+-dependent manner. Annexins are composed of a highly conserved protein core, which can bind to membranes via Ca2+-bridges and a domain at the N-terminus, which shows a high variability concerning sequence and length and contains specific sites for post-translational modification. ANX A1 is a substrate for several kinases including the EGF receptor (EGF-R). Phosphorylation can change biochemical properties of ANX A1 and also its sensitivity for proteolytic cleavage. The intracellular function of ANX A1 is still not understood although an involvement in cell proliferation, signal transduction, membrane aggregation and vesicle fusion during endocytic vesicular transport has been reported. In line with a role in endocytosis, full-length ANX A1 has been localized on early endosomes and only the protein core on late endosomes. Moreover, the protein seems to be present in multivesicular bodies where its phosphorylation by the EGF-R could affect the sorting of the internalized receptor to the degradative pathway. In the present study, the role of ANX A1 in endocytic EGF-R trafficking was addressed. Using a HeLa cell line expressing an inducible dominant-negative dynamin mutant, it was shown for the first time that ANX A1 and the EGF-R are present in the same protein complex in cells stimulated with EGF and in non-stimulated cells. The ANX A1 core domain has sufficient surface to mediate this interaction. Furthermore, ANX A1 cleavage in its N-terminal domain appears to be triggered during EGF-R internalization and endocytic trafficking. The phosphorylation status of the total cellular ANX A1 pool does not seem to be affected by EGF treatment and tyrosine phosphorylated protein was even present in the absence of growth factor. However, some highly phosphorylated ANX A1 appeared to be present following 15 min of EGF treatment only in cells with functional dynamin dependent receptor endocytosis, suggesting that some ANX A1 phosphorylation might occur in endosomal structures. ANX A1 deficient cells show a slower EGF transport as compared to ANX A1 expressing cells although biochemical approaches did not reveal a retarded EGF-R degradation in ANX A1-/- cells. In conclusion, ANX A1 seems to be present with the EGF-R during its total intracellular transport pathway ending with degradation in lysosomes and could be implicated in membrane aggregation and vesicle fusion during internalization and endosome maturation. | |||||||
| Lizenz: |  Urheberrechtsschutz | |||||||
| Fachbereich / Einrichtung: | Mathematisch- Naturwissenschaftliche Fakultät » WE Biologie | |||||||
| Dokument erstellt am: | 08.12.2003 | |||||||
| Dateien geändert am: | 12.02.2007 | |||||||
| Promotionsantrag am: | 05.12.2003 | |||||||
| Datum der Promotion: | 05.12.2003 |
