Dokument: Das TLR-Adapterprotein MyD88 in humanen Endothelzellen: Subzelluläre Lokalisation des endogenen Proteins vor und nach Inkubation mit spezifischen Toll-like Rezeptor-Liganden

Titel:	Das TLR-Adapterprotein MyD88 in humanen Endothelzellen: Subzelluläre Lokalisation des endogenen Proteins vor und nach Inkubation mit spezifischen Toll-like Rezeptor-Liganden
Weiterer Titel:	TLR adaptor protein MyD88 in human endothelial cells: subcellular distribution of the endogenous protein before and upon challenge by Toll-like receptor-specific ligands
URL für Lesezeichen:	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DocumentServlet?id=18502
URN (NBN):	urn:nbn:de:hbz:061-20110627-094521-2
Kollektion:	Dissertationen
Sprache:	Deutsch
Dokumententyp:	Wissenschaftliche Abschlussarbeiten » Dissertation
Medientyp:	Text
Autor:	Clauberg, Sigrid [Autor]
Dateien:	[Dateien anzeigen] Adobe PDF [Details] 4,43 MB in einer Datei [ZIP-Datei erzeugen] Dateien vom 22.06.2011 / geändert 22.06.2011
Beitragende:	Prof. Dr. Kolb-Bachofen, Victoria [Betreuer/Doktorvater] Prof. Dr. Däubener, Walter [Gutachter]
Stichwörter:	Toll-like Rezeptoren, TLR, MyD88, innate immunity, Endothelzellen, subzelluläre Verteilung
Dewey Dezimal-Klassifikation:	600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften » 610 Medizin und Gesundheit
Beschreibung:	Zielsetzung dieser Arbeit war es, die subzelluläre Verteilung von endogenem MyD88 sowohl in ruhenden Endothelzellen als auch nach Aktivierung durch TLR-spezifische Liganden darzustellen. Dazu wurde zunächst die Funktionalität ausgewählter TLRs – nämlich TLR3, TLR4 und TLR9 - bei verschiedenen Endothelzellen (Ea.hy 926, HMEC-1 und HDMEC) untersucht. Durch einen ELISA wurde dabei die IL-8 Sekretion nach Stimulation mit TLR-spezifischen Liganden sowohl in ruhendem Zustand als auch nach Voraktivierung durch proinflammatorische Zytokine bestimmt. Die Funktionalität des jeweiligen TLRs konnte sich in einer Steigerung aber auch in einer signifikanten Verminderung der IL-8 Sekretion äußern. Die verschiedenen Endothelzellen zeigten erwartungsgemäß differenzierte Antworten auf die Stimulation, was sich einerseits durch die Gegenüberstellung von primären Zellen und Zelllinien erklärt, aber andererseits auch deutlich auf die funktionellen Unterschiede der vielfältigen Endothelzelltypen unterschiedlicher Gewebeherkunft verweist. Ebenso war eine Modulation der Reaktivität durch die Zellkulturmediumzusammensetzung am Beispiel der Zelllinie HMEC-1 festzustellen. Für die Darstellung von endogenem MyD88 durch Immunfluoreszenz wurden Endothelzellen der Hautzelllinie HMEC-1, welche den besten Kompromiss bezüglich Reaktivität und einfacherer Handhabung in der Zellkultur gezeigt hatten, ausgewählt. Zur Immunfluoreszenzfärbung wurden zwei Antikörper gegen unterschiedliche Epitope (gegen ein internes Peptid sowie ein C-terminales Peptid) von MyD88 verwendet. Dabei zeigte sich bei den untersuchten ruhenden Endothelzellen für beide Antikörper eine diffus über das Zytoplasma verteilte Anordnung von endogenem MyD88. Überraschenderweise konnte mit dem Antikörper gegen das interne Peptid von MyD88 zusätzlich zu der diffusen Verteilung eine kondensierte Signalanreicherungen mit räumlichen Bezug zum Zellkern dargestellt werden. Ein ähnliches Bild hatte eine Immunfluoreszenzfärbung der Zelllinie EA.hy 926 mit dem gleichen Antikörper ergeben. Die kondensierten Foki waren von der Aktivierung durch TLR-spezifische Liganden unbeeinflusst, allerdings traten sie gehäufter bei stärker proliferierenden Zellen auf. Eine Kolokalisation mit gamma-Tubulin ließ auf einen Assoziation mit dem MTOC schließen.
Lizenz:	Urheberrechtsschutz
Fachbereich / Einrichtung:	Medizinische Fakultät » Institute » Institut für Molekulare Medizin
Dokument erstellt am:	27.06.2011
Dateien geändert am:	27.06.2011
Promotionsantrag am:	06.05.2010
Datum der Promotion:	10.06.2011